宮頸癌組織中的rrm1表達(dá)及臨床意義

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1、宮頸癌組織中的RRM1表達(dá)及臨床意義劉愛華（山東省蓬萊市人民醫(yī)院婦產(chǎn)科山東蓬萊265600）【中圖分類號(hào)】R737.3【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A【文章編號(hào)】1672-5085（2013）22-0231-02【摘要】木文通過研究RRM1在宮頸癌組織中的表達(dá)及意義，得出結(jié)論RRM1在宮頸癌組織中的表達(dá)明顯升高，可以作為宮頸癌的一項(xiàng)新的輔助診斷指標(biāo)。RRM1在宮頸癌組織中的表達(dá)與宮頸癌組織分化的高低有關(guān)，提示RRM1表達(dá)的增多可能在宮頸惡性腫瘤的進(jìn)展中起一定作用?！娟P(guān)鍵詞】宮頸癌RRM1Westernblot宮頸癌是女性生殖器官常見的惡性腫瘤之一，其發(fā)生被認(rèn)為是與原癌基

2、因激活和/或抑癌基因失活相關(guān)的多步驟的發(fā)展過程。RRM1基因?qū)儆谛陆l(fā)現(xiàn)的腫瘤抑制基因。木實(shí)驗(yàn)應(yīng)用Westernblot方法，檢測RRM1在正常宮頸和宮頸癌組織中的表達(dá)變化，探討其在宮頸癌發(fā)生與發(fā)展中的作用。1材料與方法1.1標(biāo)木及其來源35例新鮮宮頸癌組織標(biāo)木取自青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院婦科2009年1月至2010年7月因?qū)m頸癌行手術(shù)治療的患者，臨床分期按國際婦產(chǎn)科聯(lián)盟（FIGO）2000年修訂的標(biāo)準(zhǔn)，I期15例，II期12例，III期8例。宮頸癌病理分級(jí)按WHO的分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)，高分化11例，中分化11例，低分化13例。另取因子宮肌瘤行宮頸切除手術(shù)患者的正常

3、宮頸組織10例，新鮮標(biāo)木凍存于-80°C超低溫冰箱備用。1.2RRM1蛋白表達(dá)水平的檢測取凍存組織勻漿，提取總蛋白，并用BCA蛋白測定試劑盒（Biorad公司）進(jìn)行蛋白定量。上樣50μg總蛋白、10%SDS-PAGE分離后電轉(zhuǎn)移至硝酸纖維素膜上，用含5%脫脂奶粉的封閉液封閉lh，加入1:250稀釋的兔抗人RRM1多克隆抗體（購于北京博奧森生物技術(shù)有限公司），4°C孵育過夜。加入辣根過氧化物酶偶聯(lián)的鼠抗兔二抗（購于北京傅奧森生物技術(shù)有限公司）（1:1000）室溫孵育lh。加入SuperSignalWestFemto化學(xué)發(fā)光劑并曝光。應(yīng)用NIHImag

4、eJ圖像分析軟件對(duì)WesternBlot結(jié)果進(jìn)行分析，以β-actin蛋白的含量作為參照，分析RRM1蛋白的相對(duì)表達(dá)量。1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法應(yīng)用SPSS13.0分析軟件包對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理。數(shù)據(jù)間比較采用t檢驗(yàn)法及方差分析進(jìn)行分析，以P≤0.05為差異有統(tǒng)汁學(xué)意義。2結(jié)果2.1宮頸癌組織中RRM1mRNA和蛋白的表達(dá)RRM1蛋白質(zhì)在宮頸癌組織中的表達(dá)明顯高于正常宮頸組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)o2.2RRM1蛋白表達(dá)與宮頸癌臨床病理指標(biāo)的關(guān)系進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)，RRM1蛋白在宮頸癌組織中的表達(dá)與宮頸癌的臨床分期及冇無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)無明顯相關(guān)

5、性(P>0.05),但與癌細(xì)胞分化程度顯著相關(guān)(P<0.05)oRRM1蛋白在高分化組的表達(dá)明顯低于中、低分化組(P<0.05)；隨著分化程度的降低，RRM1表達(dá)升高。3討論宮頸癌是全球婦女中發(fā)病率僅次于乳腺癌而占第2位的惡性腫瘤，宮頸癌的早期癥狀不明顯，一旦出現(xiàn)癥狀，多已達(dá)中晚期。宮頸癌的早期發(fā)現(xiàn)、高危人群篩查、如何提高療效及患者的生存質(zhì)量是目前面臨的一個(gè)重要課題。近年來，研究發(fā)現(xiàn)DNA修復(fù)和復(fù)制的缺陷是細(xì)胞發(fā)生癌變的重要機(jī)制[1】。如果核苷酸損傷未得到及吋、冇效的修復(fù)可引起基因不穩(wěn)定性的增加，這即是引起腫瘤的原因，所以可以推斷DNA

6、修復(fù)能力與癌癥發(fā)生之間存在一定的關(guān)系。RRM1是最近被廣泛關(guān)注的一個(gè)基因，在DNA修復(fù)及惡性腫瘤的進(jìn)展、惡性轉(zhuǎn)移和腫瘤耐藥等眾多細(xì)胞活動(dòng)中扮演著重要角色。本研究采用Westernblot方法檢測RRM1蛋白在宮頸癌中的表達(dá)，結(jié)果顯示，RRM1蛋白在宮頸癌中的表達(dá)程度明顯高于正常宮頸組織；這與艿他研究者在非小細(xì)胞肺癌中的研究結(jié)果相似[2,3];表明宮頸癌組織中存在基因損傷使DNA修復(fù)基因的表達(dá)增加。RRM1在宮頸癌組織中高表達(dá)提示瘤內(nèi)DNA損傷嚴(yán)重。因此，本研究結(jié)果表明RRM1表達(dá)的增多與宮頸癌的發(fā)生有關(guān)，可以作為宮頸癌的一項(xiàng)新的輔助診斷指標(biāo)。RRM1表達(dá)

7、與宮頸癌病理分級(jí)密切相關(guān)，隨著宮頸癌分化程度的降低，RRM1表達(dá)卻增多，這表明RRM1表達(dá)的增多可能在宮頸惡性腫瘤的進(jìn)展中起?-定作用。參考文獻(xiàn)[lJBhoumikA,TakahashiS,BreitweiserW,etal.ATM-dependentphosphorylationofATF2isrequiredfortheDNAdamageresponse[J].MolCell.2005,18(5):577-587.[2】陳芹,周彩存，張頡.ERCC1、RRM1和BRCA1在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)及預(yù)后意義[J].腫瘤,2007,27(9):719-72

8、2.[3]Zheng2,ChenT,LiX,etal.,DNAsynthesis