參芪補肺湯對肺氣虛證慢性阻塞性肺疾病大鼠氣道重構(gòu)中mmp

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1、參芪補肺湯對肺氣虛證慢性阻塞性肺疾病大鼠氣道重構(gòu)中MMP.freelonarydisease；lung-Qideficiencysyndrome；airodeling；metalloproteinase；rat慢性阻塞性肺疾病(chronicobstructivepulmonarydisease,COPD)是以不完全可逆性氣流阻塞、氣道慢性炎癥和氣道重構(gòu)為特征的疾病?；|(zhì)金屬蛋白酶(MMPs)及其組織型金屬蛋白酶抑制物(TIMPs)與氣道炎癥修復重構(gòu)密切相關。中醫(yī)認為肺氣虛是COPD發(fā)生的首要條件,且貫穿疾病始終。參芪補肺

2、湯從《永類鈐方》中的補肺湯化裁而來,.freelL的藥液。吸入用布地奈德混懸液,AstraZeneca公司產(chǎn)品,批號300229,購自貴陽醫(yī)學院附屬醫(yī)院；木瓜蛋白酶,Sigma公司產(chǎn)品；兔抗MMP-9及TIMP-1多抗、即用型SABC免疫組化染色試劑盒均為武漢博士德公司產(chǎn)品；DAB顯色試劑盒,北京中山公司產(chǎn)品。1.3主要儀器超聲霧化器,德國白瑞公司；自制透明塑料箱40cm×40cm×40cm；RM2016型輪轉(zhuǎn)式石蠟切片機,上海徠卡儀器有限公司；BX51顯微鏡,日本Olympus。2實驗方法2.1造模采用《中醫(yī)實驗動物學》

3、之“肺氣虛證動物模型”復制法1,并復合木瓜蛋白酶霧化吸入法2復制“肺氣虛證”穩(wěn)定期COPD模型大鼠。用刨花、鋸末、煙葉各30～50g,另加二氧化硫粉10g,點燃煙熏,模型大鼠暴露于煙霧濃度300ppm的煙室中,每日2次,每次1h,并于造模開始后第30、32、34、36日將超聲波霧化器與40cm×40cm×40cm透明塑料箱相連,通過霧化管向箱中模型大鼠噴入濃度為0.3%的木瓜蛋白酶,每5只大鼠2mL。造模期60d。2.2分組與給藥MP-9、TIMP-1的陽性表達為胞漿內(nèi)呈棕黃色顆粒樣改變。在圖像分析系統(tǒng)上,每張切片選取小支

4、氣管2根,3個不包含支氣管、血管結(jié)構(gòu)的視野,固定光鏡倍數(shù)觀察,應用圖像分析軟件對MMP-9和TIMP-1的表達進行圖像分析,表達強度用平均光密度值(MOD)表示。2.4統(tǒng)計學方法數(shù)據(jù)用x±s表示,多組間數(shù)差異顯著性檢驗采用方差分析,多組間兩兩比較采用LSD法。數(shù)據(jù)統(tǒng)計采用SPSS15.0軟件處理。3結(jié)果3.1一般情況正常組活潑好動,皮毛光亮,體形肥胖,強壯,呼吸平穩(wěn)。模型組逐漸活動量減少,不活潑,拱背蜷臥,毛發(fā)稀疏,豎毛,無光澤,食量減少,行動遲緩,撮毛,體弱瘦小,從第20日起開始咳嗽、噴嚏頻作,后期呼吸加深、急促,符合肺

5、氣虛證的表現(xiàn)4。給藥組介于空白組、模型組之間。3.2支氣管形態(tài)學測量(見表1)表1各組大鼠支氣管形態(tài)學測量結(jié)果比較(略)注：與正常組比較,*P≤0.01；與模型組比較,△P0.05；與補高組比較,▲P0.05(下同)3.3支氣管肺組織中基質(zhì)金屬蛋白酶及其組織型金屬蛋白酶抑制物的蛋白表達(見表2)表2各組大鼠支氣管、肺組織中MMP-9和TIMP-1的蛋白表達比較(略)注：與補高組比較,★P0.054討論氣道重構(gòu)是COPD氣流受限的主要原因。肺細胞外基質(zhì)(ECM)過度沉積是氣道重構(gòu)的顯著特點之一,MMPs及TIMPs是調(diào)節(jié)EC

6、M降解合成的主要酶類。MMPs是目前所知唯一能使膠原纖維變性降解的酶,其增多可促使肺泡壁基底膜降解及肺氣腫形成,TIMPs是內(nèi)源性抑制MMPs活性的一組多功能因子家族,TIMPs抑制MMPs的活化,促進ECM沉積和抑制其降解,可促使平滑肌細胞、表皮細胞增殖5。正常情況下,MMPs與TIMPs處于平衡狀態(tài),在炎癥狀態(tài)下,炎性細胞和結(jié)構(gòu)細胞表達MMPs明顯增強,隨著病程的進展,炎性細胞減少,成纖維細胞增多,成纖維細胞也產(chǎn)生MMPs和TIMPs,且分泌MMPs弱的細胞亞群占優(yōu)勢,并分泌TIMPs增強,加上其它細胞的綜合作用,最終

7、導致MMPs/TIMPs比例下降。Vignola等6在COPD患者痰中發(fā)現(xiàn),MMP-9/TIMP-1比值低于健康人,這一比值與第1秒鐘用力呼氣容積呈正相關,表明MMPs/TIMPs失衡與ECM重構(gòu)及氣流阻塞密切相關。研究表明,COPD的發(fā)生發(fā)展與MMP-9/TIMP-1的不平衡有關7。本實驗顯示,模型組MMP-9、TIMP-1蛋白表達較正常組增高,同時其小支氣管管壁和平滑肌厚度也增厚,提示肺氣虛證COPD氣道重構(gòu)與MMP-9、TIMP-1的表達增加有關。MMP-9/TIMP-1失衡推進了氣道炎癥損傷和修復重構(gòu)。肺虛衛(wèi)氣不足

8、,衛(wèi)外不固,呼吸道防御機能和免疫調(diào)節(jié)能力下降,則易受邪侵而發(fā)病。隨病情的發(fā)展,又常累及他臟,肺病及脾,肺虛及腎,三臟相互作用,其功能失調(diào)導致痰瘀的產(chǎn)生。COPD形成并持續(xù)發(fā)展會進一步加重肺氣虛。因此,重視COPD肺氣虛證的治療尤為重要。參芪補肺湯由黃芪、黨參、補骨脂、丹參、百部、桑白皮組成。諸藥合用,共