hplc法測(cè)定黃柏膠囊中鹽酸小檗堿的含量

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1、HPLC法測(cè)定黃柏膠囊中鹽酸小檗堿的含量余曉暉，趙磊，吳福祥，劉本亮摘要：目的：建立黃柏膠囊中鹽酸小檗堿的含量測(cè)定方法。方法：采用高效液相色譜法（HPLC）測(cè)定鹽酸小檗堿的含量。結(jié)果：鹽酸小檗堿在0.05～0.5μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，r=0.9998，平均加樣回收率為96.9%，RSD=1.43%(n=5)。結(jié)論：本法操作簡便，結(jié)果準(zhǔn)確、可靠，可用于黃柏膠囊的質(zhì)量控制?！　￡P(guān)鍵詞：高效液相色譜法；黃柏膠囊；鹽酸小檗堿　黃柏膠囊是由黃柏制成的單味中藥制劑，具有清熱燥濕、瀉火除蒸、解毒療瘡等功效，臨床上主要用于濕熱瀉痢、黃疸、帶下、熱淋等，收載于《衛(wèi)生部藥品

2、標(biāo)準(zhǔn)》（中藥成方制劑，第五冊(cè)）。主藥黃柏中的鹽酸小檗堿為其抗菌成分之一〔1〕，其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中僅有黃柏的定性鑒別，為有效控制該藥品質(zhì)量，本文采用RP-HPLC法測(cè)定了主藥黃柏中的鹽酸小檗堿的含量，該方法簡便、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好，結(jié)果較滿意?！　?儀器與試藥　　SP8810高效液相色譜儀、SP200檢測(cè)器、SP4600數(shù)據(jù)處理儀（美國光譜物理公司）、鹽酸小檗堿（中國藥品生物制品鑒定所）、乙腈（色譜純?cè)噭?、重蒸水，其他試劑均為分析純。樣品為市售品（批?hào)：20020316、20010806、20010908）。　　2方法與結(jié)果〔2-4〕　　2.1色譜條件　　C18反相柱（

3、10μm,4.6mm×250mm，中國科學(xué)院大連化學(xué)物理所提供）；流動(dòng)相：0.05moL/L；磷酸二氫鉀緩沖液-乙腈（76∶24）（用磷酸調(diào)解pH值至3.5）；紫外檢測(cè)波長：270nm；流速：0.8mL/min；柱溫：室溫；理論板數(shù)（n）按鹽酸小檗堿計(jì)不低于3000。在此條件下，樣品中鹽酸小檗堿與其他相關(guān)峰均能達(dá)到基線分離，鹽酸小檗堿色譜峰的保留時(shí)間為3.77min，有關(guān)色譜圖見下圖。黃柏膠囊的HPLC圖圖1鹽酸小檗堿對(duì)照品色譜圖圖2樣品色譜圖注：A鹽酸小檗堿色譜峰　　2.2線性關(guān)系考察　　精密稱取鹽酸小檗堿4.580mg，加適量稀乙醇制成0.5mg/mL的溶

4、液，取適量微孔濾膜過濾后，精密吸取1mL，置10mL容量瓶中，用稀乙醇稀釋至刻度、搖勻，精密吸取1μL、3μL、5μL、7μL、10μL，測(cè)定峰面積積分值。以峰面積積分值為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣量（μg）為橫坐標(biāo)進(jìn)行回歸，求得回歸方程為Y=3592061X-30718.94，r=0.9998，表明鹽酸小檗堿在0.05～0.5μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。　　2.3精密度試驗(yàn)　　精密吸取同一對(duì)照品溶液（50μg/mL）5μL，連續(xù)進(jìn)樣5次，鹽酸小檗堿峰面積的RSD=1.03%。　　2.4重現(xiàn)性試驗(yàn)　　精密稱取同一樣品5份，按樣品制備方法制備，各吸取10μL進(jìn)樣、測(cè)定，鹽酸小檗堿

5、含量的RSD=2.25%?！　?.5穩(wěn)定性試驗(yàn)　　精密吸取同一樣品溶液10μL，每隔2h測(cè)定一次，共測(cè)6次，鹽酸小檗堿峰面積的RSD=2.51%（n=6）?！　?.6回收率試驗(yàn)　　取已知含量的樣品適量，分別精密加入鹽酸小檗堿對(duì)照溶液(0.5mg/mL)適量，按樣品測(cè)定方法制備和測(cè)定，計(jì)算回收率，結(jié)果見表1。表1鹽酸小檗堿回收率測(cè)定結(jié)果取樣品溶液適量研細(xì)，精密稱取樣品0.5121g，置索氏提取器中，加(1→100)鹽酸甲醇100mL，加熱回流提取至無色，放冷至室溫，濾過，濾液回收甲醇至5mL,用稀乙醇定容到100mL容量瓶中，搖勻，微孔濾膜濾過，精密吸取續(xù)濾液1

6、mL置10mL容量瓶中，稀乙醇稀釋至刻度，精密吸取該溶液10μL和2.2項(xiàng)下的對(duì)照品溶液5μL、7μL，按上述色譜條件測(cè)定，用外標(biāo)兩點(diǎn)法計(jì)算鹽酸小檗堿的含量，結(jié)果見表2。表2含量測(cè)定結(jié)果　　3討論　　測(cè)定鹽酸小檗堿含量的方法較多，有高效液相色譜法、薄層掃描法、分光光度法等。本文采用HPLC方法測(cè)定黃柏膠囊中鹽酸小檗堿含量，方法簡便、快速、結(jié)果可靠，可作為該制劑定量控制指標(biāo)。