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1、大鼠腦毀損后血漿ET-->前言損傷時間推斷是根據(jù)人體形態(tài)學(xué)及別的檢測技術(shù)對損傷產(chǎn)生的時間進行分析推斷的過程，是法醫(yī)學(xué)工作的重要內(nèi)容，目的是為了區(qū)分尸體上的損傷為生前損傷還是死后損傷及傷后存活時間的推斷，為劃定嫌疑人的活動或意圖提供線索，有益于案件的重建[1]。隨著經(jīng)濟、社會、及交通等各方面的發(fā)展，腦損傷的發(fā)生率呈不斷上升趨勢，腦損傷是最為常見的暴力機械性損傷，大量文獻報道腦損傷死亡率高達23.4%～44.7%[2-3]。所以，腦損傷也成為國內(nèi)外法醫(yī)病理學(xué)研究的主要死因之一。以往腦損傷時間的推斷是以損傷后腦組織常規(guī)病理學(xué)形態(tài)改變?yōu)橐罁?jù)的[4-6]，隨著
2、醫(yī)學(xué)及科學(xué)技術(shù)的發(fā)展和相互滲透，法醫(yī)病理學(xué)也進入了快速發(fā)展時代，已經(jīng)可以充分運用免疫組織化學(xué)[7]、原位雜交和圖像分析等技術(shù)[8]將腦損傷的研究發(fā)展到超微及分子水平[9].越來越多的研究顯示，腦損傷一段時間內(nèi)可以觸發(fā)一系列的形態(tài)及生化反應(yīng)，使腦組織發(fā)生遲發(fā)性損害，現(xiàn)已知約有2萬種蛋白質(zhì)基因在腦內(nèi)特異性表達。隨著研究的不斷深化，損傷時間的推斷也將更加精準(zhǔn)。內(nèi)皮素（Endothelin，簡稱ET）是上世紀(jì)80年代由日本學(xué)者Yanagisa切口，剝離骨膜，以人字縫前3mm，顱骨正中線旁3mm處用骨鉆鉆一直徑約為5mm的圓形骨窗，使硬腦膜充分暴露，并保持完好
3、，自制一打擊墊放入骨窗，模擬自由落體打擊裝置，以50g砝碼沿導(dǎo)管于40cm高處落下打擊骨窗處，觀察片刻后以骨臘封閉骨窗，縫合頭皮。正常組不做任何處理，對照組SD大鼠僅做鉆孔處理，不做自由落體打擊，不致腦損傷。遂將大鼠置于室內(nèi)安靜、清潔的鼠籠中進行正常飼養(yǎng)，然后依據(jù)實驗設(shè)計損傷時間點取材并將大鼠處死。損傷組大鼠受高處自由落體重物打擊后，見骨窗內(nèi)腦組織突起并有少量出血，出現(xiàn)小便失禁及肌張力增高的表現(xiàn)，出現(xiàn)一定程度的瞳孔改變，肢體抽搐及意識障礙，各種生理反射包括瞳孔對光反射、角膜反射、睫毛反射及刺痛反應(yīng)消失，傷后各項反射消失超過30分鐘內(nèi)恢復(fù)認(rèn)為模型制作成
4、功。材料和方法.............6實驗結(jié)果...............10討論..........................12結(jié)論.........................14討論1內(nèi)皮素的化學(xué)結(jié)構(gòu)內(nèi)皮素（ET）是由日本學(xué)者Yanagisawa在1988年首次從豬動脈內(nèi)皮細胞中分離出的一種由21個氨基酸組成的血管活性肽物質(zhì)，Inoue等[15]用基因Southern分析技術(shù),明確人體內(nèi)有三種ET基因分別編碼ET-1、ET-2、ET-3三種異構(gòu)肽，它們結(jié)構(gòu)相似，氨基酸序列具有很高的同源性，都具有相同的氨基酸殘基組成的疏水性C末
5、端，鏈內(nèi)有兩個雙硫鍵（1-15和3-11位之間）[16]。但ET-2、ET-3與ET-1相比，分別有2個和6個氨基酸不同。三種ET異構(gòu)肽氨基酸序列圖如（附錄二圖1）[17]所示。在人體內(nèi)，ET-1的含量最高，ET-1主要在內(nèi)皮細胞表達，ET-2在腎臟表達，而ET-3主要在神經(jīng)系統(tǒng)和腎臟中進行表達。2內(nèi)皮素的作用機制ET通過與特異受體結(jié)合，激活磷脂酶C（PLC），生成三磷酸肌醇（IP3）和甘油二酯（DG），隨之生成四磷酸肌醇（IP4），IP3促使胞內(nèi)Ca2+釋放，而IP4則引起細胞膜鈣通道開放，造成胞外Ca2+內(nèi)流，導(dǎo)致胞內(nèi)Ca2+超載，但與此同時，又
6、激活蛋白激酶C（PKC），使Ca2+由胞內(nèi)向胞外泵出，降低胞內(nèi)Ca2+濃度，維持相對的穩(wěn)態(tài)。在生理條件下，內(nèi)皮素發(fā)揮著調(diào)節(jié)血管張力和微循環(huán)血流灌流[18]的作用。在化學(xué)和機械刺激下均可誘導(dǎo)ET的合成，ET幾乎參與了機體所有的應(yīng)激炎癥反應(yīng)，當(dāng)機體受到某種應(yīng)激刺激時，通過細胞因子的調(diào)節(jié)作用，導(dǎo)致內(nèi)皮素增加[19]。ET最顯著地作用是縮血管作用，另外還具有正性心肌力，刺激釋放多種激素，促進血管內(nèi)皮細胞，纖維原細胞的增殖作用。ET在心血管，神經(jīng)，內(nèi)分泌，消化，呼吸系統(tǒng)以及腫瘤等疾病的進程中也發(fā)揮著重要的作用[20-23]。........結(jié)論1本實驗參照Fe
7、eneys法，成功復(fù)制了自由落體打擊致腦損傷的大鼠模型。2本實驗采用兩種檢測方法，共同驗證了腦損傷后血漿ET-1的顯著表達，表明腦損傷可誘導(dǎo)血漿ET-1的合成，但隨損傷時間的不同，ET-1的含量表達程度不同，表明血漿ET-1的表達與損傷時間有一定關(guān)聯(lián)性。3有研究表明，正常人血漿ET-1的水平隨年齡的增長而有所增高[38]，可認(rèn)為是血漿ET-1用于法醫(yī)實踐中腦損傷時間推斷的影響因素。4還有研究表明，腦損傷后患者血漿內(nèi)皮素水平升高，與損傷程度有關(guān)[39-41]。故ET-1含量作為腦損傷時間推斷的指標(biāo)還需結(jié)合損傷程度綜合分析。血漿ET-1可作為日后法醫(yī)損傷
8、時間推斷的一項指標(biāo)，但其存在單一性和局限性，還需結(jié)合更多敏感性指標(biāo)來準(zhǔn)確推斷。動物實驗存在多種不可抗拒因素和
