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《離體毛囊切片兩種制作方法的比較及凋亡檢測》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫。
1、離體毛囊切片兩種制作方法的比較及凋亡檢測【關(guān)鍵詞】體外培養(yǎng)摘要：目的對人頭皮游離毛囊(HF)切片制作及凋亡檢測方法進行比較。方法分別將石蠟切片法和冰凍切片法應(yīng)用于游離毛囊；利用原位缺口末端標記法(TUNEL)進行熒光染色與3，3′二氨基聯(lián)苯胺(DAB)染色,檢測未經(jīng)培養(yǎng)的游離毛囊及培養(yǎng)5d的游離毛囊的不同部位凋亡細胞情況。結(jié)果在對游離毛囊形態(tài)檢測中，各組毛囊在外根鞘(ORS)，毛球(HB)下部，真皮鞘(DS)及毛乳頭(DP)中的凋亡細胞數(shù)并無顯著性差異(P>0.05)。結(jié)論冰凍切片法應(yīng)用于游離毛囊簡
2、單有效，TUNEL原位熒光結(jié)合DAB染色適合于檢測毛囊細胞凋亡情況?！ ￡P(guān)鍵詞：毛囊；體外培養(yǎng)；凋亡 parisonoftethodsofsectionmakinganddetectionofapoptosismethodonhumanscalphairfollicleinvitro ABSTRACT:ObjectiveToparetethodsofsectionmakingandtodetecttheapoptosisonhumanhairfollicle(HF)invitro.MethodsThe
3、paraffinsectionandfrozensectionmethodsinobenzidine(DAB)staining]akingfrozensectionoresimpleandfeasibleonsinglehairfollicle.Theapoptoticindexofouterrootsheath(ORS),loalsheath(DS)anddermalpapilla(DP)ofeverygroupshadnodifference(P>0.05).ConclusionThemetho
4、doffrozensectionorefeasibleonthesectionmakingofsinglehairfollicle.TheTUNELalcuttingtemperature,OCT)修出一平臺，再用無損傷鑷將毛囊以垂直刀口方向(毛球部朝向刀口)放在已修出的平臺上，然后以O(shè)CT覆蓋，冷凍10min后作4μm厚的冰凍切片，邊切邊在顯微鏡下觀察，以便獲得游離毛囊完整的中心縱剖面?！ ?.3人頭皮游離毛囊石蠟切片的制作選取形態(tài)好的游離毛囊，用Bouin固定液固定30min，乙醇脫色，15g/L瓊脂
5、加熱溶化并冷卻到50℃時將組織放入浸泡,待瓊脂完全凝固后，將內(nèi)有毛囊的瓊脂用刀片修成5mm3左右的長方形小塊，再固定30min后，按梯度進行脫水，二甲苯透明，常規(guī)包埋，再以石蠟切片機修整后，調(diào)整角度，切成7μm左右的切片，HE染色?！ ?.4原位細胞凋亡檢測采用原位細胞凋亡檢測試劑盒，DAB顯色試劑盒(北京中山生物技術(shù)有限公司)，用原位熒光染色結(jié)合DAB染色進行分析，對毛囊Auber限界線下的毛球部、毛囊外根鞘細胞、毛囊真皮鞘及毛乳頭細胞進行分析。計數(shù)各毛囊切片的不同部位的凋亡指數(shù)(陽性細胞數(shù)/細胞總數(shù)×
6、100%)。 1.5統(tǒng)計學(xué)處理數(shù)據(jù)輸入SPSS11.0進行分析，各組數(shù)據(jù)經(jīng)KolmogorovSmirnov檢驗P>0.05，尚不能認為各組樣本來自的總體不服從正態(tài)分布，且各組數(shù)據(jù)經(jīng)Levene方差齊性檢驗P>0.05。故運用t檢驗進行分析。 2結(jié)果 2.1游離毛囊的基本結(jié)構(gòu)特征冰凍切片形態(tài)：HE染色后在光學(xué)顯微鏡下可見毛皮質(zhì)、內(nèi)皮根鞘、外皮根鞘（ORS）及真皮鞘(DS)等清晰結(jié)構(gòu)；各層間連續(xù)性較好，分離較少。整個毛球（HB）部邊緣平整，結(jié)構(gòu)清楚，核漿比例大，細胞形態(tài)清晰。毛乳頭（DP）
7、邊界清楚圓滑，呈梭形。內(nèi)根鞘呈粉紅色連續(xù)帶狀，緊貼于毛小皮。外根鞘細胞較多，核深染。真皮鞘中可見少量的成纖維細胞，與外根鞘分離較少。 石蠟切片形態(tài)：可分辯出各層的大體結(jié)構(gòu)，但各層之間有明顯的分離，靠近毛干側(cè)分離嚴重。整個毛球部邊緣不規(guī)整，結(jié)構(gòu)混亂，細胞形態(tài)不清晰。毛乳頭邊界不清。內(nèi)皮根鞘不完整，中間有較多中斷，且與毛小皮有明顯的分離（圖1）。外根鞘細胞層次少，與真皮鞘有非常明顯的分離。真皮鞘呈條帶狀與其他結(jié)構(gòu)完全分開?！ D1正常人頭皮游離毛囊的形態(tài)（略） Fig.1Thestatusofnormal
8、humanscalphairfollicle a:frozensectionmethod;b:paraffinsectionHE10×10 2.2凋亡狀況的光鏡觀察結(jié)果在加入熒光素dUTP后，加入轉(zhuǎn)化劑POD之前，在500-550nm波長熒光顯微鏡下可見到以藍色熒光激發(fā)出的綠色熒光的陽性結(jié)果(圖2a)；加入轉(zhuǎn)化劑POD后DAB顯色，蘇木素復(fù)染后可見棕色的陽性細胞和藍色的陰性細胞(圖2b)。未經(jīng)培養(yǎng)的生長期游離毛囊的凋亡情況
