缺氧海馬神經元中katp對基因bax表達的影響

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1、缺氧海馬神經元中KATP對基因Bax表達的影響【摘要】目的研究缺氧海馬神經元中KATP對基因Bax表達的影響。方法對原代海馬神經元進行缺氧和藥物處理，倒置顯微鏡和NF免疫組織化學法觀察細胞生長和形態(tài)，MTT法檢測細胞凋亡率，RTPCR檢測Bax基因mRNA表達水平。結果與單純缺氧組比較，缺氧+二氮嗪組和缺氧+甲苯磺丁脲組的多級神經元百分率和細胞存活率差異有顯著性(P<0.01)。缺氧+二氮嗪組中基因Bax的mRNA表達水平與單純缺氧組相比下降(P<0.01)，缺氧+甲苯磺丁脲組中基因Bax的mRNA表達水平相對于單純缺氧組也有提高(P<0.05)。結

2、論缺氧時KATP的開放對細胞具有保護作用，它通過降低Bax的表達抑制缺氧海馬神經元的凋亡?！娟P鍵詞】KATP;Bax基因;缺氧;海馬神經元Abstract:ObjectiveTostudytheeffectofKATPongeneBaxinhippocampalneuronsunderhypoxiacondition.MethodTheneuronsedicine.InvertedmicroscopeandimmunohistochemistryofNFedtoassessthegroorphologyofthecells.CellviabilityeasuredRNA

3、levels.ResultsparedultipolarneuronandsurvivalrateofprimaryculturedhippocampalneuronsindiazoxideandtolbutamideentsshoRNAlevels(P<0.01)inneuronsculturedatseverehypoxiaconditionparedoxia.Inhypoxiagroups,tolbutamideincreasedBaxmRNAexpression(P<0.05),palneuronsfromhypoxiabysuppressingBa

4、xexpression.　　Keypalneuron　　ATP敏感性鉀通道廣泛分布于中樞神經系統(tǒng)和其他外周組織中，調控多種生理活動。缺氧作為一種重要的生理應激反應，自然也受到KATP的調控，但其具體的機制還不是很清楚。Bax是一種重要的細胞調節(jié)因子，其產物可以使線粒體釋放細胞色素C，從而誘導細胞進入凋亡途徑。本實驗選取了KATP特異性激動劑二氮嗪和抑制劑甲苯磺丁脲[1]來處理常氧和缺氧時的神經元，觀察KATP通道的開關對于基因Bax表達的影響，從而初步探討KATP對神經元保護的具體機制?！　?材料與方法　　1.1材料　　實驗動物出生后1d的SD大鼠，雌雄不限，由南方醫(yī)

5、科大學實驗動物中心提供，許可證號：SCXK粵20060015。　　主要試劑DMEM高糖培養(yǎng)液干粉(GIBICO);多聚賴氨酸10mg/L(Sigma公司,USA);血清(杭州四季青公司);甲苯磺丁脲(Sigma公司，USA);二氮嗪(Sigma公司，USA);二步法免疫組化檢測試劑盒(DAKO);Trizol(Invitrogen，USA);一步法RNAPCR試劑盒(Takara，Japan)?！　?.2細胞培養(yǎng)　　取出生后1d的SD乳鼠，用體積分數75%的乙醇消毒，斷頭置于DHanks平衡鹽溶液中。無菌條件下解剖出大鼠的大腦組織并置于另一含有Dhanks的器皿內

6、。輕輕剔除腦膜及血管組織，進一步分離出雙側海馬組織。移至含有Dhanks的小青瓶內，剪成約1mm×1mm×1mm小塊(以上步驟均在冰上操作)。加入5倍體積的1.25g/L胰酶(四季清)(37℃)，消化10min，中間輕輕振搖2～3次，用含體積分數20%FBS的DMEM終止消化，400目篩網過濾，除去未消化完全的組織塊。將過濾得到的細胞懸液移入離心管中，1000r/min離心5min。此時大部分的神經細胞已經沉淀到離心管底部，去除上層培養(yǎng)液，加入新培養(yǎng)液，用吸管輕輕吹打，重新懸浮細胞。將細胞濃度調至1×106個/mL左右，接種于包被有多聚賴氨酸(10mg/mL，Sigm

7、a)的培養(yǎng)板中，置于φ=5%的CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)(37℃)，48h后使用阿糖胞甘(AraC)處理細胞48h，以去除其中的增殖細胞，以后每3天換液1次，每次換半量。使用的是含有體積分數10%胎牛血清(四季清)、青霉素1U/L單位和鏈霉素100mg/L單位(Gibco)的DMEMF12培養(yǎng)基(四季清)進行培養(yǎng)?！　?.3缺氧處理和分組　　實驗分為6組。①常氧組：細胞于37℃孵育,并持續(xù)通以950mL/LO250mL/LCO2混合氣。②常氧+二氮嗪組：細胞培養(yǎng)7d左右時換為含有100μmol/L二氮嗪的培養(yǎng)基，細胞于37℃孵育，并持續(xù)通以