對(duì)elisa方法檢測(cè)hbsag結(jié)果的分析

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1、對(duì)ELISA方法檢測(cè)HBSAg結(jié)果的分析張立英(鞍山K:大醫(yī)院檢驗(yàn)科114005)【中圖分類號(hào)】R512.6【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A【文章編號(hào)】1672-5085(2013)07-0188-01當(dāng)前國(guó)內(nèi)臨床檢測(cè)乙型肝炎表面抗原(HBSAg)多采用ELISA雙抗體夾心法，其基木原理是:1.將抗體被在載體后作為固相，加入待測(cè)標(biāo)木，使其中的相應(yīng)抗原通過免疫學(xué)反應(yīng)結(jié)合到固相抗體上，洗滌除去未結(jié)合的抗原。2.加入酶結(jié)合物與已結(jié)合在固相抗體上的抗原反應(yīng)，并洗滌除去未結(jié)合的游離未結(jié)合物。3.加入酶(常用辣根過氧化物酶)的相應(yīng)底物，固相化的酶催化底物反應(yīng)生成有色產(chǎn)物。在一定溫度下一定時(shí)間后

2、終止反應(yīng)，顯色物的量與在固相上的抗原有關(guān)。該方法檢測(cè)HBSAg時(shí)，影響的因素很多，有內(nèi)源性物質(zhì)和外源性物質(zhì)兩大類。血清是最常見的EUSA標(biāo)木,大約有40%的人血清標(biāo)木中含有類風(fēng)濕因子，補(bǔ)體，嗜異性抗體，嗜靶抗原自身抗體等非特異性物質(zhì)，對(duì)ELISA測(cè)定有干擾作用易造成假陽性或假陰性結(jié)果，這不是人為因素造成的。在臨床檢驗(yàn)工作中，常因標(biāo)木量多，緊急要求出檢驗(yàn)報(bào)告，較難逐個(gè)分析其內(nèi)源性的物質(zhì)，而忽略它的存在。而工作中，因血樣的采集，儲(chǔ)存及操作程序等不當(dāng)所致的外源性物質(zhì)的干擾，最易影響EUSA的測(cè)定結(jié)果。木文對(duì)檢驗(yàn)工作中經(jīng)常岀現(xiàn)的如標(biāo)木溶血，標(biāo)木被細(xì)菌污染，標(biāo)木儲(chǔ)存過久，標(biāo)木

3、凝固不全等因素進(jìn)行分析。1.標(biāo)木溶血由于各種人為因素引起標(biāo)木溶血，使紅細(xì)胞溶解細(xì)胞內(nèi)的過氧化物酶進(jìn)入血漿，并大量吸附于細(xì)胞碎片及纖維蛋白原上，從而造成以辣根過氧化物酶為標(biāo)記的EUSA測(cè)定中，非特異性顯色，出現(xiàn)假陽性。有試驗(yàn)證明溶血標(biāo)木HBSAg假陽性率達(dá)91.7%[1】。要認(rèn)真做好標(biāo)木的保存和處理工作，防止溶血。2.標(biāo)木受到污染標(biāo)木受細(xì)菌污染，因菌體中可能含有內(nèi)源性辣根過氧化物酶同樣易產(chǎn)生非特異性顯色，出現(xiàn)假陽性。1.標(biāo)本放置吋間在冰箱中保存過久的標(biāo)本，血清中IGg可聚合成多聚體，AFP可形成二聚體，在ELISA測(cè)定中會(huì)導(dǎo)致本底過深，其至造成假陽性。采血后若不在當(dāng)天

4、檢測(cè)，應(yīng)置于2-8°C冰箱中，若要儲(chǔ)存，則置于-20°C低溫冰箱內(nèi)保存。2.標(biāo)本凝固不完全在沒有促凝劑和抗凝劑存在的情況下，正常血液自然存在放l-2h后，再用3000pm離心15分鐘。臨床檢驗(yàn)工作中，常常因爭(zhēng)取吋間快速檢測(cè)，在血清還未凝固完全時(shí)即強(qiáng)行離心分離血清，血清中殘留的部分纖維蛋白原，在ELISA測(cè)定過程中可形成肉眼可見的纖維蛋白塊，易造成假陽性，次tl復(fù)查吋因血己凝固完全，血清中不在含有纖維蛋白原，結(jié)果顯示為陰性。3.血清標(biāo)本中HBSAg含量的影響0前國(guó)內(nèi)用于檢測(cè)HBSAg的ELISA是雙抗體夾心一步法，檢測(cè)HBSAg吋，HBSAg標(biāo)本中濃度奮一定范圍。標(biāo)本

5、中HBSAg濃度過高，冋應(yīng)鉤狀效應(yīng)（LOOK）現(xiàn)象出現(xiàn)假陰性［2,3］。而在二步法中，高濃度的HBSAg與包被的HBSAg“飽和”地結(jié)合，多余部分被洗掉，隨后加入的酶結(jié)合的HBSAb正好通過HBSAg的“橋梁”作用結(jié)合在酶標(biāo)板上，顯示陽性結(jié)果。另外不單項(xiàng)檢測(cè)HBSAg，而是檢測(cè)乙肝五項(xiàng)指標(biāo)或檢測(cè)HBSAg兩項(xiàng),可以解決因高濃度的HBSAg而出現(xiàn)的假陰性［4］。低濃度樣本（HBsAg濃度介于0.5-5ug/ml）的血清標(biāo)本，ELISA顯色較弱，冋樣會(huì)導(dǎo)致假陰性，對(duì)于HBSAg濃度大于5ug/ml的血標(biāo)本，ELISA檢測(cè)HBSAg約有1.58%的假陰性，血清HBSAg濃

6、度在5ug/ml以下的弱陽性約有2.92%的假陽性率［5】。若結(jié)合MEIA（微粒子酶免疫試驗(yàn)）及其中和確認(rèn)試驗(yàn)進(jìn)行檢測(cè)，能有效提高低濃度HBSAg的檢出率［6］。4.ELISA檢測(cè)方法的靈敏度是冇限的現(xiàn)國(guó)產(chǎn)第三代ELISAHbsAg試劑盒檢測(cè)HbsAg的窗U期為72d,即使目前的最高試劑的窗U期HbsAg也為50d［7】，因此處于窗U期的血液檢測(cè)當(dāng)前結(jié)果為陰性，下次檢測(cè)結(jié)果可能為陽性。手工操作影響的因素很多，標(biāo)本量人加樣后放入孵育箱前等待吋間過長(zhǎng)(尤其是室內(nèi)溫度比較高)；放入孵育箱孵育時(shí)未貼封片或加蓋，造成標(biāo)本和稀釋液蒸發(fā)，吸附在孔壁，導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周

7、圍，難以徹底清洗，使結(jié)果造成假陽性。加樣后馬上貼膠紙片混均振蕩放入孵育箱；標(biāo)本過多時(shí)可分批操作；嚴(yán)格按照說明書控制操作時(shí)間。在實(shí)際工作中，要認(rèn)真做好樣本的保存和處理工作，以減少外源性因素的影響，保證檢驗(yàn)結(jié)果可靠。參考文獻(xiàn)[1】詹彤，高美霞，薛敏，等.溶血樣本對(duì)乙肝表面抗原檢測(cè)的影響{j}.臨床輸血與檢驗(yàn)，2002，4(3)：46.[2】許斌，朱定虎，.EUSA檢測(cè)HbsAg影響因素的討論⑴.臨床檢驗(yàn)雜志，2000,18(4)：232.[3】單桂秋，李秋生.檢測(cè)乙型肝炎表面抗原一步法試劑的鉤狀效應(yīng)分析[」].中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，3(2).[4】李秋生，肖韶英，楊華文