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1、麥冬水煎劑的遺傳毒性研究論文.freelg(原藥材)/mL4個濃度組在非代謝活化(-S9)和代謝活化(+S9)條件下與L5178Y細胞作用3h,表達2d,制備突變頻率平板并培養(yǎng)12d,計數(shù)大、小細胞集落的孔數(shù),計算總突變率(MF)和小集落突變百分率(SC%)；在MNT中,每組10只ICR小鼠,雌雄各半,.freelphomaAssay(MLA)andMouseBoneMarrog(crudedrug)/mLetabolicactivation(+/-S9),thenexpressedfor2days.Themutationfrequencyplatesutation
2、frequencyandthepercentageofsmallcolonymutantsice(5males/5females)ineachgroup,themiceurbonesear.Foreachmouse,thenumberofmicronucleatedpolychromaticerythrocytes(MNPCE)in2000polychromaticerythrocyteseanrateofMNPCEineachgrouputationfrequencyofdoselevelsshoallcolonymutantsilararroutationinL
3、5178Ycellsetabolicactivation,ithintsthatthetestarticlemayhavepotentialgenotoxicityforhumanbodies.RadixOphiopogonisdecoctiondidnotshoosomedamageofbonemarroice,ithasnogenotoxicityinvivoetabolicactivation.Keyphomaassay；bonemarroicronucleustest；genotoxicity；mice麥冬具有養(yǎng)陰生津、潤肺清心的功效,用于肺燥干咳、虛勞咳嗽
4、、津傷口渴、心煩失眠、內(nèi)熱消渴、腸燥便秘及咽炎等多種疾病的治療。為使麥冬列入法國藥典,進入法國銷售市場,筆者受中法草藥工作組之托、按照合作項目要求,在GLP管理體制下1,采用國內(nèi)外遺傳毒性試驗指導(dǎo)原則2-3推薦的標準組合中的小鼠淋巴瘤細胞試驗(MLA)4及小鼠骨髓微核試驗(MNT)5對麥冬水煎劑進行了遺傳毒性研究。1材料1.1供試品麥冬原藥材由中國藥品生物制品檢定所中藥室采購,水煎劑由北京同仁堂科技發(fā)展股份有限公司制備。麥冬水煎劑為棕色液體,試驗前于4℃冰箱、避光保存。MLA檢測用原液濃度為2.69g(原藥材)/mL；MNT檢測用原液濃度為2.67g(原藥材)/mL
5、。1.2陰性(溶媒)對照品MLA使用本中心PNT使用市售氯化鈉注射液,批號07070641,購自天津藥業(yè)焦作有限公司。1.3陽性對照品MLA的非代謝活化(-S9)試驗使用甲基甲烷磺酸酯(MMS,批號12K3671)；代謝活化(+S9)試驗及MNT使用環(huán)磷酰胺(CP,批號91K1176)；均購自Sigma公司。1.4細胞小鼠淋巴瘤細胞L5178Ytk+/--3.7.2C,引自日本國立醫(yī)藥品食品衛(wèi)生研究所,液氮保存；細胞復(fù)蘇后進行了支原體檢查及自發(fā)突變細胞清除和自發(fā)突變率檢測,合格細胞傳代5次以內(nèi)使用。1.5動物ICR小鼠50只,雌雄各半；微生物級別：VAF；北京維通利
6、華實驗動物技術(shù)有限公司提供,許可證編號：SCXK(京)2007-0001。動物購入時周齡：7～8周；體重：雌21.8～26.4g,雄27.1～31.5g；動物購入后于本中心動物管理室檢疫馴化5d。1.6培養(yǎng)基、試劑與染液小鼠MLA使用：①完全培養(yǎng)基由RPMI1640培養(yǎng)基(GIBCO)、0.2%resco,終濃度200μg/mL)配制而成,根據(jù)用途不同分為含10%馬血清(傳代培養(yǎng))、含20%馬血清(96孔板培養(yǎng))和不含馬血清(清洗、稀釋)的培養(yǎng)液。②突變選擇劑三氟胸苷(TFT,終濃度3μg/mL),批號41K1144,購自Sigma公司。③代謝活化劑S9(由苯巴比妥
7、鈉與β-萘黃酮聯(lián)合誘導(dǎo)處理大鼠肝而獲得,本中心自制),實驗當日與180mg/mL的Glucose-6-Phosphate、25mg/mL的NADP、0.15mol/L的KCl等輔助因子溶液,按2︰1︰1︰1(mL)的比例配制成S9混合液,1h內(nèi)使用。S9在處理液中的終濃度為2%。小鼠MNT使用：①胎牛血清(天津市川貝生化制品有限公司)；②甲醇(北京化工廠)；③GiemsaStain(Sigma),臨染色前用1/15mol/L磷酸緩沖液(pH6.8)配制3%Giemsa應(yīng)用液；④吖啶橙(Fluka),臨染色時將0.1%吖啶橙染液與1/15mol/L磷酸緩沖液(pH
