全氟辛烷磺酸對大鼠興奮性氨基酸影響論文

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1、全氟辛烷磺酸對大鼠興奮性氨基酸影響論文【摘要】目的探討全氟辛烷磺酸（PFOS）與大鼠中樞神經(jīng)系統(tǒng)興奮性氨基酸的時間反應關系。方法將成年g/（kg·bol/（g·protein），與對照組（1.30±0.063）μmol/（g·protein）比較，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05）。天冬氨酸無顯著變化。甘氨酸8,24h含量分別為（1.24±0.352），（1.09±0.215）μmol/（g·protein），與對照組（1.54±0.120）μmol/（g·protein）比較.freelol/（g·protei

2、n），與對照組（2.03±0.370）μmol/（g·protein）比較，差異有統(tǒng)計學意義(P0.05）。結(jié)論低劑量PFOS染毒后中樞神經(jīng)系統(tǒng)出現(xiàn)先抑制后興奮的癥狀可能與興奮性氨基酸的參與有關。【關鍵詞】全氟辛烷磺酸全氟辛烷磺酸（Perfluorooctanesulfonate，PFOS）是近年來引起環(huán)境學者密切關注的新發(fā)現(xiàn)的持久性環(huán)境有機污染物，具有難溶性、生物蓄積性和沿食物鏈向高位營養(yǎng)級的生物體內(nèi)富集的作用〔1〕。研究表明,PFOS可引起恒河猴體重減輕、血液多種生理生化指標異常、肝細胞空泡化等改變〔2〕。

3、PFOS的污染已遍及全球生態(tài)系統(tǒng)〔3〕。本實驗旨在對低劑量PFOS暴露條件下，大鼠腦組織中的谷氨酸、天冬氨酸、甘氨酸、γ-氨基丁酸含量的時間變化進行測定，探討PFOS神經(jīng)毒性作用機制。1對象與方法11試劑與儀器全氟辛磺酸鉀鹽（瑞士fluka公司），用2%吐溫-80配制。鄰苯二甲醛、氨基酸標準品谷氨酸、天冬氨酸、甘氨酸、γ-氨基丁酸（美國Sigma公司）。醋酸鉀為分析純，甲醇為色譜純。高效液相色譜儀為HPHEm×4.6mm5μm）（美國Phenomenex公司）。超聲波細胞粉碎機JY96-ⅡN（寧波新芝生物科技

4、股份有限公司）。12實驗動物分組及處理健康成年g/(kg·bin，在冰水浴條件下超聲腦組織，3500r/min，4℃離心20min，取上清100μl用考馬斯亮藍法進行蛋白定量。另取上清1ml10000r/min，4℃高速離心20min后，取其上清，以備氨基酸測定。14考馬斯亮藍法測定腦組織蛋白質(zhì)含量稱取10mg小牛血清蛋白，溶于蒸餾水中，分別稀釋配制成0.2，0.4，0.6，0.8，1mg/L的標準品。分別取100μl待測樣品加入考馬斯亮藍5ml，722分光光度計比色，測定待測樣品中的蛋白質(zhì)含量以備標定氨基

5、酸。1.5鄰苯二甲醛(OPA)柱前衍生高效液相色譜熒光法檢測氨基酸含量標準液配制：分別用1mol/L氫氧化鈉溶液配制谷氨酸、天冬氨酸、甘氨酸及γ-氨基丁酸標準品1mmol/L的儲備液，臨時用1mol/L氫氧化鈉稀釋配制成0.01，0.05，0.1，0.5，1，5，10，100μmol/L的標準系列。衍生試劑配制：稱取20mg鄰苯二甲醛，0.5mlβ-巰基乙醇溶于0.5ml甲醇中；再加入9ml0.4mol/L硼酸緩沖液(pH為10.5);超聲溶解，新鮮配制，避光保存。衍生化反應：在室溫下，吸取氨基酸標準液或樣品液

6、100μl，1mol/L氫氧化鈉溶液100μl，加入鄰苯二甲醛衍生試劑400μl，混勻靜置2min后，進樣30μl。16色譜條件色譜柱：C18色譜柱（150mm×4.6mm5μm），柱溫為28℃。流動相A：0.1mol/L醋酸鉀溶液，pH=5.89。流動相B：HPLC級甲醇。B相梯度洗脫條件：0～10min10%→25%；12～19min47%→60%；22～27min100%→100%，28min10%，平衡5min，30min結(jié)束洗脫。用安捷倫色譜工作站記錄并分析結(jié)果，峰面積用外標法定量。熒光檢測器，激發(fā)

7、波長250nm，發(fā)射波長410nm。17統(tǒng)計分析采用SPSS11.5軟件進行方差分析。2結(jié)果21行為觀察PFOS染毒組大鼠在染毒2h后出現(xiàn)活動減緩，少動呆臥，嗜睡，24h后活動恢復正常。對照組未見異常改變。22色譜行為在上述色譜條件下，標準液及大鼠腦組織中的谷氨酸、天冬氨酸、甘氨酸和γ-氨基丁酸均得到良好分離。2.3不同PFOS急性染毒時間腦組織氨基酸含量變化比較（表1）表1PFOS暴露時間大鼠腦組織氨基酸含量的比較（略）注：與對照組比較,*P0.05不同實驗組的天冬氨酸含量無明顯變化；谷氨酸含量在2,4

8、,8h組與對照組比較，差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)；4h組含量降至最低后逐漸升高，24h已恢復正常。而抑制性氨基酸甘氨酸含量8,24h組與對照組比較，差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)；γ-氨基丁酸24h組與對照組比較，差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。3討論天冬氨酸與谷氨酸是中樞神經(jīng)系統(tǒng)主要的興奮性神經(jīng)遞質(zhì)，其釋放增加可導致神經(jīng)興奮性或神經(jīng)毒性作用增強。γ-氨基丁酸、甘氨酸被認為是重要的