小鼠lewis肺癌胸腔移植模型的建立

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1、小鼠Lewis肺癌胸腔移植模型的建立【摘要】目的：　通過(guò)胸腔移植的方法建立晚期肺癌的動(dòng)物模型。方法：　經(jīng)C57BL/6小鼠的腋后線第6肋間胸腔(胸腔模型組)或小鼠腋部皮下(皮下模型組)分別移植鼠源性Lel（5×106ml-1），觀察小鼠的生存時(shí)間、小鼠體重、飼料消耗量、游泳試驗(yàn)、常壓耐缺氧試驗(yàn)，大體觀察胸腔、縱隔、胸水等肺癌細(xì)胞浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移情況。結(jié)果：　胸腔模型組小鼠中位數(shù)生存時(shí)間13.5（8～18）d，皮下模型組小鼠中位數(shù)生存時(shí)間45（25～71）d，胸腔模型組的生存期范圍離散程度較皮下模型組小（Ｐ<0.05）。病程中胸腔模型組小鼠體重下降、攝食減

2、少等惡病質(zhì)體征較皮下模型組明顯（Ｐ<0.01），胸腔模型組小鼠活動(dòng)減少、睡眠時(shí)間縮短、蜷曲、毛發(fā)脫落等現(xiàn)象較皮下模型組多見(jiàn)，胸腔模型組小鼠游泳實(shí)驗(yàn)及耐缺氧實(shí)驗(yàn)時(shí)間較皮下模型組明顯縮短（Ｐ<0.01），胸腔模型組小鼠早期可出現(xiàn)胸水和腫瘤轉(zhuǎn)移，而皮下模型組小鼠早期未見(jiàn)胸水和腫瘤轉(zhuǎn)移。結(jié)論：胸腔移植模型可作為晚期肺癌動(dòng)物模型?！娟P(guān)鍵詞】Lel-1，鏈霉素100IU·ml-1）的DMEM(GIBCO公司產(chǎn)品)完全培養(yǎng)液中培養(yǎng)，條件是37℃、5%CO2，2～3d更換1次培養(yǎng)液。細(xì)胞總數(shù)達(dá)到要求時(shí)用2.5%胰酶消化。消化前2h新鮮培養(yǎng)液換液1次，消化后再

3、用新鮮培養(yǎng)液洗1次，臺(tái)盼藍(lán)拒染法測(cè)定活細(xì)胞數(shù)大于95％，調(diào)節(jié)細(xì)胞濃度為5×106ml-1細(xì)胞懸液備用。1.2動(dòng)物有C57BL/6遺傳背景的小鼠由徐州醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供并飼養(yǎng)于SPF級(jí)環(huán)境，室溫(25±2)℃，給予無(wú)菌全價(jià)營(yíng)養(yǎng)顆粒飼料及無(wú)菌水。本研究選用的小鼠為6～8周齡的雄鼠200只，體重平均(18±1)g。1.3方法200只小鼠隨機(jī)分為胸腔模型組和皮下模型組，每組100只，將制作好的Ｌel（5×106ml-1）。1.4生存指標(biāo)檢測(cè)1.4.1生存期造模至小鼠死亡的時(shí)間。1.4.2體重在每日20:00～21:00時(shí)用電子稱測(cè)量每只小鼠的體重，精確到1/

4、100g，資料存入EXCEL備檢驗(yàn)。1.4.3飼料消耗量在每日20:00～21:00時(shí)定量給予小鼠飼喂無(wú)菌全價(jià)營(yíng)養(yǎng)顆粒飼料，24h測(cè)量盒內(nèi)剩余的飼料量，計(jì)算小鼠的飼料消耗量，精確到1/100g。飼料攝取量=前日飼料重量－次日測(cè)得飼料重量。1.4.4小鼠游泳實(shí)驗(yàn)在每組造模后第14天，令各組動(dòng)物在水溫(17±1)℃下游泳，用相當(dāng)于小鼠體重10%的橡皮泥在每只小鼠尾部負(fù)重，分別放入玻璃缸內(nèi)游泳并計(jì)時(shí)，注意觀察當(dāng)小鼠頭部沉入水中10s不能浮出水面者即為體力耗竭，即刻計(jì)時(shí)，為小鼠游泳時(shí)間，比較各組小鼠因游泳致疲勞而死亡的時(shí)間。1.4.5小鼠常壓耐缺氧實(shí)驗(yàn)每組造模后

5、第14天，各組的小鼠分別放入裝有25g鈉石灰的容積為250ml的廣口瓶?jī)?nèi)（每瓶置放1只小鼠），用凡士林涂抹瓶口，使之不漏氣，立即計(jì)時(shí)，以呼吸停止為指標(biāo)，觀察小鼠因缺氧而死亡的時(shí)間，比較各組常壓下的耐缺氧時(shí)間。1.4.6大體觀察觀察胸腔模型組小鼠胸腔、縱隔、心包、胸水等肺癌細(xì)胞浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移情況。1.5數(shù)據(jù)處理用SPSS11.5軟件包處理，數(shù)據(jù)以x±s表示，組內(nèi)差異采用方差分析（ANOVA），組間差異采用t檢驗(yàn)，生存期取中位數(shù)并繪制生存曲線，Ｐ<0.05為統(tǒng)計(jì)學(xué)差異有顯著性。2結(jié)果2.1小鼠生存期觀察胸腔模型組中位數(shù)生存時(shí)間13.5（8～18）d，皮下模

6、型組中位數(shù)生存時(shí)間45（25～71）d。胸腔模型組的生存期范圍離散程度較皮下模型組?。ǎ?lt;0.05）。2.2小鼠生存狀態(tài)觀察胸腔模型組小鼠體重下降、攝食減少等惡病質(zhì)狀態(tài)較皮下模型組明顯，病程中胸腔模型組小鼠活動(dòng)減少、睡眠時(shí)間縮短、蜷曲、毛發(fā)脫落等癥狀較皮下模型組多見(jiàn)（圖1、2）。2.2.1體重平均體重胸腔模型組小鼠為（12.19±4.69）g，皮下模型組小鼠為（19.40±1.10）g，胸腔模型組較相應(yīng)皮下模型組體重下降明顯（Ｐ<0.01）。2.2.2飼料消耗飼料平均消耗量胸腔模型組小鼠為（1.67±1.01）g，皮下模型組為(3.16±0.

7、11)g，胸腔模型組與相應(yīng)皮下模型組相比下降明顯（Ｐ<0.01）。2.2.3耐缺氧實(shí)驗(yàn)及游泳實(shí)驗(yàn)平均游泳時(shí)間胸腔模型組為(12.67±3.27)s，皮下模型組為(80.33±9.56)s，兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Ｐ<0.001)。平均耐缺氧時(shí)間胸腔模型組為(42.50±5.61)min，皮下模型組為(96.50±23.57)min，兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Ｐ<0.005）。2.2.4大體觀察胸腔模型組小鼠出現(xiàn)胸水和腫瘤轉(zhuǎn)移，如縱隔、心包和肝轉(zhuǎn)移等（圖3～6）。皮下模型組未見(jiàn)腫瘤轉(zhuǎn)移。3討論小鼠的肺腫瘤在組織發(fā)生、臨床過(guò)程和組織形態(tài)學(xué)

8、上都與人類肺癌有相似之處。特別是應(yīng)用近交系小鼠，便于實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，使動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確