白芷香豆素的鎮(zhèn)痛作用部位及其機制論文

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1、白芷香豆素的鎮(zhèn)痛作用部位及其機制論文王海莉王春梅李賀崔新穎【摘要】目的觀察白芷香豆素(CoumarinofAngelicaeDahuricae,CAD)的鎮(zhèn)痛作用部位及其機制。方法利用小鼠福爾馬林實驗及側腦室注射CAD對小鼠熱板痛反應潛伏期的影響以分析CAD的鎮(zhèn)痛作用部位;觀察CAD對甲醛所致傷害性疼痛模型小鼠血清一氧化氮(NO)和腦組織中β內啡肽(βEP)含量的影響。結果CAD(30,60,120mg/kg)不同程度地抑制了小鼠福爾馬林實驗第一和第二時相反應。側腦室注射CAD(6mg/kg)明顯延長小鼠熱板痛

2、反應潛伏期。CAD(30,60,120mg/kg)連續(xù)給藥4d,使甲醛所致傷害性疼痛模型小鼠血清NO含量和腦中βEP含量明顯下降。結論CAD對物理、化學等傷害性刺激具有明顯鎮(zhèn)痛作用,作用部位可能既在中樞也在外周.freelechanismsunderlyingofCoumarinsofAngdicaeDahuricae(CAD).MethodsTheantinociceptivesiteofCADiceformalintestandmicehotplatetestafterintracerebroventric

3、ular(icv)administration;theconcentrationofnitricoxide(NO)inserumandβEPinbrainofmiceeasuredethodandradioimmunoassay(RIA)respectively.ResultsCAD(30,60,120mg/kg)reducedthefirstandsecondphaseresponsesofmiceformalintestparedeicvadministrationofCAD(6mg/kg)formice

4、,hotplatelatencyandβEPinbrainofmiceinducedbyformalinayberelatedtocentralandperipheralmechanisms.【Keya公司產(chǎn)品;NO試劑盒,由南京建成生物工程研究所提供,批號:20061221;β內啡肽放射免疫測定盒,由北京??其J生物技術中心提供,批號:070115。1.2福爾馬林致痛法〔5〕小鼠60只,雌雄各半,隨機分為6組,分別為對照組、嗎啡組、阿司匹林組、CAD低、中、高劑量組。嗎啡組和阿司匹林組腹腔注射(ip)給藥后0.

5、5h,其余各組ip給藥后2h,每鼠右后足跖皮下注射0.25%福爾馬林10μl。分別記錄注射后0~5min(第一時相)和15~30min(第二時相)小鼠舔或抖被注射足的累計時間,以秒(s)為計算單位。1.3小鼠側腦室注射法〔6〕小鼠40只,隨機分為4組,分別為對照組、嗎啡組、CAD組、CAD同容積腹腔注射組。固定小鼠后,使用10μl微量注射器,針頭外連細長硬塑料管,硬塑料管接4號針頭,使針尖部露出約2.5mm的進針長度,于兩耳前緣線與矢狀線交點處的前、外各2mm處進針注射0.5%伊文思藍生理鹽水溶液,注射容積10μl

6、,時間5s,留針10s,處死小鼠,解剖觀察伊文思藍是否進入腦室,以確定注射部位。按上述方法進行小鼠側腦室給藥,然后以熱板法分別測定給藥后5、15、30、45、60min小鼠痛閾,觀察鎮(zhèn)痛效應。1.4CAD對甲醛所致傷害性疼痛模型小鼠血清NO含量和腦βEP含量的影響小鼠50只,雌雄各半,隨機分5組,分別為陰性對照組、嗎啡組、CAD低、中、高劑量組,每天分別腹腔注射,連續(xù)4d(嗎啡組除外),末次給藥后(1.5h后陽性組腹腔注射嗎啡10mg/kg)2h,每只鼠右后足跖皮下注射0.25%甲醛溶液20μl,2h后處理〔7〕

7、。將小鼠快速斷頭取血,分離血清,-20℃冰箱保存待測。小鼠頭部立即于冰臺上分離全腦,投入沸生理鹽水中煮4min,取出濾紙吸干、稱重,制備10%腦組織勻漿,取上清液貯存于-20℃保存。采用硝酸還原酶法和放射免疫學方法分別測定血清中NO含量和腦組織中βEP的含量,具體步驟說明書。1.5統(tǒng)計學方法數(shù)據(jù)以x±s表示,采用SPSS10.1軟件進行兩組間t檢驗和多組間方差分析。2結果2.1CAD對小鼠福爾馬林實驗的影響小鼠一次性腹腔注射給藥CAD30,60,120mg/kg,與對照組比較,CAD中、高劑量組使福爾馬林實驗第一

8、時相內舔或抖注射足累計時間明顯減少(P0.01),.freelg/kg側腦室給藥能明顯延長痛反應潛伏期(P0.05),給藥后15min開始顯效(P0.01),可持續(xù)到90min以上(P0.01),而相同劑量ip則對痛反應潛伏期無明顯影響。嗎啡組給藥后立即開始顯效(P0.001),在5~15min效應最顯著(P0.001),并可持續(xù)到90min以上(P0.05

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