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1、陰虛對(duì)荷瘤小鼠腫瘤生長(zhǎng)的影響論文鄭里翔張玉仁朱衛(wèi)豐劉紅寧【摘要】目的為闡明陰陽(yáng)失衡對(duì)腫瘤生長(zhǎng)的影響。方法采用甲狀腺素和利血平、氫化可的松分別制作陰虛、陽(yáng)虛模型,并接種S180瘤株；用RT-PCR的方法分析腫瘤細(xì)胞基因表達(dá)的水平。結(jié)果陰虛組的瘤重均高于正常和陽(yáng)虛組,而差異不明顯（P0.05），但影響腫瘤增殖的PA基因表達(dá)水平明顯高于正常和陽(yáng)虛組(P0.05)。結(jié)論陰虛體質(zhì)可加速腫瘤的生長(zhǎng)，其機(jī)理可能是增加腫瘤細(xì)胞中的PA基因的表達(dá)?！娟P(guān)鍵詞】陰陽(yáng)虛荷瘤小鼠瘤重基因表達(dá)Abstract：ObjectiveToelucidatetheinfluenceof"Yin"and
2、"Yang"imbalanceontumoroccurrence.MethodsThyroxineodelrespectively.Thenthemodelmiceorcells.Thelevelofgenesexpressionororethanthenormalgroup'sand"Yang"deficientgroup’s,butthedifferenceorproliferationalgroupand"Yang"deficientgroup(P0.05).Conclusion"Yin"deficientphysiquecanacceleratetumorg
3、roechanismmaybethatitincreasesthePAgeneexpressionintumorcells.Keyorbearingmicein"Yin"and"Yang"deficient;Tumorg／支)蘇衛(wèi)藥準(zhǔn)字(1982)第241701號(hào)，批號(hào)：20010302，揚(yáng)州制藥廠生產(chǎn);甲狀腺素，批號(hào)：0607501。利血平，SIMGA公司，批號(hào)：2000497。儀器：低溫高速離心機(jī)，BECKMEN；PCR擴(kuò)增儀GeneAmpPCRsystem9700(ABI)、凝膠成像系統(tǒng)Fluorchem9900(Alphainnotech)；試劑：TRIZO
4、L試劑盒購(gòu)自上海生物工程技術(shù)公司;M-MLVReverseTranscriptionKIT購(gòu)自上海晶美生物技術(shù)公司;MIX：上海晶美公司；其余的試劑均為分析純1.2方法1.2.1動(dòng)物模型的制備陰、陽(yáng)虛模型參閱鄭里翔［7］，造模后根據(jù)陽(yáng)虛癥狀的客觀指標(biāo)：怕冷、畏寒喜暖、四肢不溫或厥逆、小便清長(zhǎng)、脈細(xì)、舌淡胖、倦縮拱背、精神萎頓、消瘦等確定模型成功與否;而陰虛組癥狀給藥第1～2天無(wú)明顯變化。第3～4天開(kāi)始出現(xiàn)躁動(dòng)不安、皮毛汗?jié)裼纫砸归g為甚，大便或干或濕，飲食量無(wú)明顯改變，第5天肛門紅,24h飲水量增加。第6～7天起出現(xiàn)日間神疲少動(dòng)，體重減輕,清瘦,確定模型成功。1.2.
5、2腫瘤模型建立于超凈工作臺(tái)中，先取S180肉瘤瘤液0．1ml，以生理鹽水20倍稀釋，光學(xué)顯微鏡下計(jì)算1ml瘤液中活體瘤細(xì)胞數(shù)，以此計(jì)算瘤液的稀釋倍數(shù)，用生理鹽水稀釋成2×106個(gè)／0．2ml。置于冰中保存，75％酒精消毒小鼠右腋皮膚，按每鼠0．2ml接種于小鼠右腋皮下,10日處死小鼠并稱體重，嚴(yán)格按標(biāo)準(zhǔn)剝離干凈皮下腫瘤組織，使用電子秤稱量瘤重(精確到0．01g)，并迅速放到液氮中。1.2.3Trizol試劑提取總RNA提取冷凍組織(約0．1g)剪碎后加入液氮后碾成粉末，加1mlTrizol，徹底混勻。加0．3mI氯仿，用力搖勻后離心。取上清，加1mI異丙醇沉淀水相中
6、的RNA，得到的RNA經(jīng)75％乙醇漂洗后溶解于DEPC水中。用紫外分光光度儀測(cè)總RNA的純度及濃度(波長(zhǎng)260／280nm)。RT—PCR的方法：首先逆轉(zhuǎn)錄cDNA，進(jìn)行PCR擴(kuò)增，PCR反應(yīng)混合物總體積50ul。PCR引物、反應(yīng)條件（見(jiàn)表1）。PCR反應(yīng)產(chǎn)物在1％的瓊脂糖凝膠電泳，紫外燈下攝像，以β-actin為內(nèi)參，用凝膠成像分析系統(tǒng)進(jìn)行半定量分析。表1引物、產(chǎn)物大小及條件（略）1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法各數(shù)據(jù)均以±s表示，，應(yīng)用SPSS11.5統(tǒng)計(jì)分析軟件處理實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù),組間用t檢驗(yàn)。2結(jié)果2.1接種瘤株的第10天,.freelsandhybridinsulin/IGF-
7、Ireceptorsinhumancancer［J］.CurrPharmDes.2007，13(7):671.［2］Broediatedbyreactiveoxygenspecies［J］.CancerRes.2007，15;67(8):3512.［3］陳玉龍苗艷艷腫瘤病機(jī)研究思路［J］.新中醫(yī)，2007，39(4):91.［4］張玉芝淺談中醫(yī)藥抗腫瘤的思路與體會(huì)［J］.時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2006，l7（8）：58.［5］鶴賈英杰淺談《脾胃論》在中醫(yī)治療腫瘤中的應(yīng)用［J］.內(nèi)蒙古中醫(yī)藥，2007，35（1）：65.［6］袁兆莊平衡醫(yī)學(xué)與陰陽(yáng)調(diào)控［J］.中華現(xiàn)代皮膚科
