桃核承氣湯對(duì)蓄血證大鼠血管mmp2,timp2基因表達(dá)的影響

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1、桃核承氣湯對(duì)蓄血證大鼠血管MMP2,TIMP2基因表達(dá)的影響【摘要】［目的］觀察桃核承氣湯對(duì)蓄血證大鼠血管基質(zhì)金屬蛋白酶2(MatrixMetalloprotEinase2，MMP2)及金屬蛋白酶2組織抑制劑(TissueInhibitorofMetalloprotEInase2，TIMP2)基因表達(dá)的影響，探討此方的作用機(jī)制。［方法］半定量RT－PCR檢測(cè)各組大鼠頸總動(dòng)脈勻漿中MMP2、TIMP2基因的表達(dá)，進(jìn)行分析。［結(jié)果］與模型組相比,藥物組減少了MMP2基因的表達(dá)，增加了TIMP2的表達(dá)(P<0.01)。［結(jié)論］桃核承氣湯能改變蓄血證大鼠動(dòng)脈壁MMP2、

2、TIMP2基因的表達(dá)，這可能是其主要作用機(jī)制之一?！娟P(guān)鍵詞】桃核承氣湯；蓄血證；基質(zhì)金屬蛋白酶2；金屬蛋白酶2組織抑制劑　　Abstract：［Objective］ToinvestigatetheeffectsofTaohechengqitang(THCQT)onthegeneexpressionofMatrixMetalloproteinase2(MMP2)andTissueInhibitorofMetalloproteinase2(TIMP2)inarteryvesselofXuxuezhengrats.［Methods］Halfquantitativereversetran

3、scriptionpolymerasechainreaction(RTPCR)odelgroup，MMP2geneexpressionlevelsintheTHCQTgroupayaccountfortheeffects.　　Keya公司產(chǎn)品，用生理鹽水配成20μg/ml的溶液。藥液制備：桃仁∶大黃∶桂枝∶芒硝∶甘草=2∶2∶1∶1∶1（中藥飲片由浙江中醫(yī)藥大學(xué)門診部提供），適量水煎，頭煎20min，二煎30min，分別濾取藥液，合并兩次藥液，在60℃恒溫條件下濃縮成每ml含生藥1g的藥液備用。主要試劑：Trizolreagent,美國(guó)Invitrogen公司產(chǎn)品；反轉(zhuǎn)錄試劑盒(Rever

4、seTranscriptionSystem)，美國(guó)Promega公司；TaqDNA聚合酶，Takara公司；βactin引物由上海生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司合成。主要儀器：臺(tái)式高速冷凍離心機(jī)，德國(guó)Heraeus公司；PCR儀，TECHNE；紫外分析儀，ZF－1型，上海嘉鵬科技公司；電泳儀，DYY－8B型穩(wěn)壓穩(wěn)流電泳儀；核酸蛋白儀，AmershamBiosciences。　　1.2方法將30只大鼠按隨機(jī)數(shù)字表法分成空白對(duì)照組(control)、模型組(model)、藥物組(THCQT)3組，每組10只。造模方法參考　　3討論　　MMPs是一類Zn2+依賴性內(nèi)肽酶，在降解各種細(xì)胞外基質(zhì)(Extra

5、cellularMatrix,ECM)中起著重要的作用，也因此對(duì)組織器官發(fā)育、創(chuàng)傷愈合、血管新生、骨的生成、巨噬細(xì)胞游走等生理過(guò)程都有著重要的影響；在許多病理狀態(tài)下，MMPs表達(dá)的增加與活性增高進(jìn)而導(dǎo)致ECM的變化可以引起組織的損傷，許多疾病和其有著密切的關(guān)系，如腫瘤細(xì)胞周圍的ECM降解是腫瘤細(xì)胞發(fā)生浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移的必要步驟。MMP2又名明膠酶A（GelatinaseA），屬于MMPs家族中的明膠酶類，主要作用是降解IV型膠原和明膠。實(shí)驗(yàn)證實(shí)肝癌［3］、食管癌［4］、宮頸癌［5］、腎癌［6］等各種腫瘤疾病中均可以發(fā)現(xiàn)MMP2的顯著高表達(dá)。TIMP2是MMP2的天然抑制物，是抑制MMPs活性

6、的多功能因子家族中的成員，MMP2和TIMP2兩者基因表達(dá)水平的變化，對(duì)諸多疾病的形成、發(fā)展與預(yù)后都有著相當(dāng)大的影響。除了腫瘤，還有諸如肝纖維化［7］、心血管?。?］等嚴(yán)重危害人民健康的疾病的進(jìn)展中，兩者也都起著相當(dāng)大的甚至關(guān)鍵的作用。MMPs抑制劑類藥物的研究開發(fā)是當(dāng)前對(duì)腫瘤等疾病的防治的研究熱點(diǎn)之一?，F(xiàn)代中醫(yī)藥研究已經(jīng)證實(shí)相當(dāng)多的中藥可以對(duì)MMP2，TIMP2進(jìn)行有效干涉?！　　靶钛C”出自《傷寒論》，廣泛用于諸多種存在熱瘀之象的內(nèi)傷疾病的病機(jī)分析。有學(xué)者認(rèn)為，心血管病、腫瘤等疾病的一些發(fā)展階段與中醫(yī)的蓄血證類似［9］。如有效地治療糖尿病腎?。?0］、急性腦出血［11］等各科疾?。?/p>

7、而實(shí)驗(yàn)研究也表明其有抗腫瘤［12］等作用?！　”緦?shí)驗(yàn)結(jié)果顯示蓄血證造?？墒勾笫蟮腗MP2基因的表達(dá)明顯增加，TIMP2基因的表達(dá)明顯減少，提示中醫(yī)的蓄血證涉及到MMPs的改變，而后者引起的組織的損傷可能是蓄血證病理變化的重要因素；聯(lián)系前述的MMPs與腫瘤的關(guān)系，有關(guān)腫瘤等疾病的發(fā)展過(guò)程中可以出現(xiàn)類似蓄血證病變的論斷在一定程度上得以證實(shí)，由此可能可以運(yùn)用蓄血證理論對(duì)腫瘤等疑難重癥進(jìn)行及早而有效的