cxcr4-sdf1對(duì)乳腺癌細(xì)胞mcf7增殖作用的影響論文

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1、CXCR4/SDF1對(duì)乳腺癌細(xì)胞MCF7增殖作用的影響論文【摘要】目的：探討CXCR4/SDF1生物學(xué)軸對(duì)人乳腺癌細(xì)胞MCF7生長與增殖的影響.方法：采用CF7細(xì)胞CXCR4蛋白的表達(dá).以CXCR4單克隆抗體（CXCR4mAb）作用MCF7細(xì)胞，通過MTT比色法、軟瓊脂克隆形成實(shí)驗(yàn)和細(xì)胞周期檢測觀察MCF7細(xì)胞的生長情況；通過流式細(xì)胞儀檢測MCF7細(xì)胞的增殖細(xì)胞核抗原（PA）表達(dá).結(jié)果：MCF7細(xì)胞表達(dá)CXCR4蛋白；CXCR4mAb作用后，MCF7細(xì)胞生長能力明顯降低，并且PA蛋白含量由對(duì)

2、照組的（91.6±5.3）％降為（78.1±3.6）％（P0.05）.結(jié)論：CXCR4mAb可明顯抑制MCF7細(xì)胞的增殖.【關(guān)鍵詞】CXC趨化因子受體4基質(zhì)細(xì)胞衍生因子MCF7細(xì)胞CXCR4單克隆抗體增殖0引言近年研究表明，腫瘤細(xì)胞可以表達(dá)某些趨化因子（chemokines）或趨化因子受體，并且趨化因子及其受體可能通過與炎癥細(xì)胞浸潤相似的機(jī)制參與腫瘤細(xì)胞的發(fā)生、發(fā)展與侵襲轉(zhuǎn)移過程［1-2］.CXC趨化因子受體4（CXCchemokinereceptor4，CXCR4）與其配體-趨化因子CXCL12，即基

3、質(zhì)細(xì)胞衍生因子1（stromalcellderivedfactor1,SDF1）相互作用構(gòu)成一個(gè)細(xì)胞信息傳遞的生物學(xué)軸（biologicalaxis）.freelAb進(jìn)行體外實(shí)驗(yàn)性干預(yù)，觀察MCF7細(xì)胞的生長能力及細(xì)胞增殖相關(guān)蛋白的變化，以闡明CXCR4/SDF1生物學(xué)軸對(duì)乳腺癌細(xì)胞增殖的影響.1材料和方法1.1材料人乳腺癌細(xì)胞系MCF7由第四軍醫(yī)大學(xué)航空航天醫(yī)學(xué)系謝滿江博士惠贈(zèng)；CXCR4mAb（IgG2b44717.111clone)購于美國Sigma公司；噻唑藍(lán)（tetrazoliumb

4、lue，MTT）、碘化丙啶（propidiumiodide,PI）為美國Sigma公司產(chǎn)品；辣根過氧化物酶標(biāo)記的羊抗鼠二抗、羊抗鼠FITCHRP抗體與鼠抗人增殖細(xì)胞核抗原（proliferatingcellnucleusantigen,PA）抗體購于北京華美公司.MCF7細(xì)胞用RPMI1640（含100mL/L胎牛血清）在37℃，50mL/LCO2孵箱中常規(guī)培養(yǎng).1.2方法1.2.1MCF7細(xì)胞CXCR4蛋白的表達(dá)取對(duì)數(shù)生長期的MCF7細(xì)胞，加入RIPA(RadioImmunoprecipitat

5、ionAssay，美國Pierce)裂解液.冰上靜置10min后，以4℃，10000r/min離心5min后取上清.采用BCA法（BCAproteinassayreagentkit，美國Pierce）進(jìn)行蛋白定量后，蛋白樣品加入等體積的2×SDS凝膠上樣緩沖液混勻，置于沸水浴中加熱10min.蛋白樣品（每孔上樣量均為20μg總蛋白）以80mg/LSDS聚丙烯酰胺凝膠（Novex,SanDiego,美國CA）進(jìn)行電泳分離，分離的蛋白條帶轉(zhuǎn)移至硝酸纖維素膜（hybondECLmembrane,美國Amers

6、hamLifeScienceInc.,ArlingtonHeights,IL）上.4℃以含100g/L脫脂奶粉的TBST封閉過夜后，加入用封閉液稀釋的CXCR4mAb（1∶1000）室溫孵育1h；以TBST洗膜3×10min；以TBS稀釋辣根過氧化物酶標(biāo)記的山羊抗鼠二抗（1∶5000），室溫孵育1h后，以TBS洗10min×2.最后用增強(qiáng)的化學(xué)發(fā)光反應(yīng)混合液（enhancedchemiluminescence，ECL，美國Pierce）顯色，感光膠片（hyperfilmECL,美國AmershamLifeS

7、cienceInc.,ArlingtonHeights,IL）曝光.1.2.2MCF7細(xì)胞生長能力取對(duì)數(shù)生長期的MCF7細(xì)胞以2.5g/L胰酶消化，再以5×106/L的細(xì)胞密度接種于96孔板.37℃，50mL/LCO2條件下培養(yǎng)過夜后，加入含有50mg/LCXCR4mAb的培養(yǎng)液（根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，選取50mg/L作為實(shí)驗(yàn)濃度)，空白對(duì)照組加相應(yīng)體積的培養(yǎng)液.MCF7細(xì)胞分別培養(yǎng)24，48，72，96h后，加入終濃度為5mg/L的MTT10μL，繼續(xù)培養(yǎng)4h后吸取培養(yǎng)液，每孔加入DMSO150μL溶解結(jié)

8、晶，充分振蕩15min，用酶聯(lián)免疫檢測儀測定各孔490nm吸光度值（A490）.繪制各組生長曲線并計(jì)算細(xì)胞存活率.細(xì)胞存活率＝實(shí)驗(yàn)組各孔平均A490值/相應(yīng)對(duì)照孔平均A490×100％.另取對(duì)數(shù)生長期的MCF7細(xì)胞以2.5g/L胰酶消化，再以400個(gè)/孔的細(xì)胞密度接種于已制備好瓊脂培養(yǎng)基的6孔板中.培養(yǎng)過夜后，以50mg/LCXCR4mAb作用48h后，再以含100mL/L胎牛血清的RPMI1640培養(yǎng)液繼續(xù)培