磁分離酶聯(lián)免疫技術檢測fsh、lh和hcg論文

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1、磁分離酶聯(lián)免疫技術檢測FSH、LH和hCG論文.freel、550nm、630nm同時檢測，程序編輯，曲線繪制，微機控制，打印輸出)，磁性分離器和混勻器(由北京倍愛康生物技術有限公司提供)。2.2試劑FSH、LH和hCGSEROZYME試劑盒。內(nèi)容包括：FITC和牛ALP標記鼠抗人hCG、FSH和LH單克隆抗體，F(xiàn)SH、LH和hCG系列標準液，磁分離試劑，清洗濃縮液，基質(zhì)液，稀釋緩沖液和終止液。2.3檢測標本臨床病人，空腹采血。2.4檢測方法按試劑盒說明書進行操作。先繪制標準曲線，復管測定，用SEROZYME-I型酶聯(lián)免疫定量測定儀對FSH、LH和hCG進行定量程序測定，自動繪制標準曲線，并

2、將數(shù)據(jù)貯存入相應的定量程序中。然后以同樣方法檢測待測標本，各管用儀器直接測定讀數(shù)。分為4個步驟：(1)抗原抗體反應：加入待測血清及反應試劑37℃水浴保溫15分鐘，使其形成抗原抗體復合物。(2)磁性分離：加入磁分離試劑，使磁性顆粒與抗原抗體復合物結合，在磁場的作用下沉淀復合物，洗滌，沉淀棄去未反應的試劑。(3)顯色反應：加入基質(zhì)單磷酸酚酞，使結合在免疫復合物上的酶遇到相應的底物時，發(fā)生催化反應，產(chǎn)生有色物質(zhì)酚酞，加入終止液，該液顯桃紅色。顏色反應的深淺與相應的抗體或抗原量成正比。因此，可以借助于顏色反應的深淺來定量測定抗體或抗原的量。(4)讀出結果：將已顯色的標準管和測定管嚴格按操作程序在SE

3、ROZYME-I型酶聯(lián)免疫定量測定儀上直接讀取結果，每秒測一管。3結果3.1標準曲線(線性范圍)各標準液濃度相對應的吸光度在儀器經(jīng)對數(shù)處理后，線性良好。hCG濃度在0～500mIU/mL，F(xiàn)SH在0～150mIU/mL，LH在0～200mIU/mL范圍內(nèi)與吸光度成線性關系。3.2顯色穩(wěn)定性試驗空白對照(底物液+終止液)和測定管(酶標抗體+底物+終止液)在加終止液后，在不同時間內(nèi)(1分鐘，5分鐘，10分鐘，20分鐘，30分鐘，1小時，2小時，4小時，6小時，和24小時)觀察其吸光度(550hm)變化。4討論在雙抗體夾心酶聯(lián)免疫測定法(MAIA)中，分離游離型標記抗體和標記抗體-抗原復合物是一重

4、要環(huán)節(jié)。分離方法有多種，其中磁性分離技術具有分離完全而快速的優(yōu)點，但因磁性抗體免疫試劑制備困難而限制了該技術的推廣。瑞士Serono診斷中心發(fā)明這種磁性抗體免疫技術，稱MAIA，為酶聯(lián)免疫分析中磁性分離技術的推廣和應用創(chuàng)造了條件。Serono磁性分離試劑用抗熒光素標抗體與直徑1μm的粒子結合成為磁性微?？篃晒馑乜贵w，它是一種非同位素免疫檢測系統(tǒng)。由于抗原抗體反應在液相中進行，不僅反應速度快，而且均勻，時間明顯短于固相分離。我們對該方法在線性范圍、顯色穩(wěn)定性、精密度和精確度等方面進行評價。結果顯示：標準曲線范圍較寬，重復性良好；儀器能儲存前次測定的標準曲線數(shù)據(jù)，不需要每次作標準曲線，可以進行急

5、診標本的檢測，整個檢測過程僅需1～2小時。我們在1天24小時不同時間內(nèi)觀察空白管和測定管的吸光度變化，結果為空白管吸光度的變異系數(shù)為0．023，測定管吸光度的變異系數(shù)為0．004。表明該方法以堿性磷酸酶作為標記物，單磷酸酚酞作為基質(zhì)，酚酞呈色穩(wěn)定，重復性較好。將三份不同濃度的標本作連續(xù)檢測，觀察其精密度，批內(nèi)變異(n=10)：LH平均為2．26％，F(xiàn)SH為2．29％，hCG為2．85％；批間變異(n=5)：IM平均為6．6％，F(xiàn)SH為2．59％。同時，我們分別將不同濃度的LH和FSH加到標本中，作回收試驗檢測其精確性。結果：LH平均回收率為104．5％，F(xiàn)SH為93．5％。表明該方法具有較高

6、的精密度和精確度，能滿足臨床測定的要求。FSH、LH和hCG的磁性抗體免疫檢測方法簡單，包括孵育、分離、顯色和測定四步連續(xù)進行，標準曲線繪制及計算結果自動程序化，檢測速度快，每秒一管，顯著地堤高了工作效率，滿足醫(yī)生和病人即刻測出結果的要求。儀器采用三波長同時檢測，可消除試管因素的誤差，也增大儀器量程5倍，達10個吸光度，溶液顯色穩(wěn)定。該項技術采用了非同位素的堿性磷酸酶作標記物，免除了對人體和環(huán)境有害的放射性物質(zhì)污染。各項性能指標可與同位素標記的RIA相媲美。采用磁性抗體免疫試劑，開創(chuàng)了磁分離酶聯(lián)免疫的實用技術，這將是一項很有廣闊發(fā)展前途的檢測方法。