高效液相色譜法測(cè)定大黃中的大黃素、大黃酚的含量論文

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1、高效液相色譜法測(cè)定大黃中的大黃素、大黃酚的含量論文【關(guān)鍵詞】高效摘要：采用高效液相色譜法中的梯度洗脫測(cè)定大黃中的大黃素、大黃酚的含量。結(jié)果顯示，所測(cè)得的二組分的含量和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為0.1189%、2.3%；0.4213、3.1%，提示該法操作簡(jiǎn)單，結(jié)果可靠，與藥典法沒(méi)有顯著性差異。關(guān)鍵詞：高效液相色譜法；梯度洗脫；大黃素；大黃酚大黃是我國(guó)臨床常用的中藥之一，素有“將軍”之稱，在中藥復(fù)方中應(yīng)用相當(dāng)廣泛，有“瀉熱通暢、涼血解毒、逐瘀通經(jīng)、攻積導(dǎo)滯、利膽退黃”之功效.freel×50mm.5μm；預(yù)柱:C18(4.

2、6×50mm)5μm)（大連依利特公司）。12試劑大黃素、大黃酚對(duì)照品購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所；大黃生藥材為市售（產(chǎn)地為甘肅、四川）；乙腈為色譜純，其余為分析純。2方法與結(jié)果21色譜條件0.04MNH4OAC水溶液（PH=2.8）：乙腈=A:B；梯度洗脫：0分鐘A:B=71:29，12分鐘A:B=21:79，14分鐘A:B=21:79，15分鐘A:B=71:29。檢測(cè)器：紫外檢測(cè)器；波長(zhǎng)：436nm；流速：1.0ml/min；進(jìn)樣體積：10μl；柱溫箱溫度：25℃。22標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制精密稱取大黃素、大黃酚對(duì)照品

3、各0.0020g分別置于10ml容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻即為大黃酚和大黃素的標(biāo)準(zhǔn)貯備液，濃度為2mg/ml。以標(biāo)準(zhǔn)貯備液為基礎(chǔ)，以甲醇為溶劑準(zhǔn)確配制濃度為0.05、0.1、0.15、0.2、0.25mg/ml系列濃度。精取10μl注入液相色譜儀中以對(duì)照品峰面積為縱坐標(biāo)，對(duì)照品進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，其回歸方程為：C大黃素=7.0632×10-7A＋0.00094，r=0.9997，C大黃酚=10.672×10-7A＋0.00156，r=0.9998。在本研究色譜條件下，當(dāng)信噪比為3時(shí)測(cè)得大黃素和

4、大黃酚的最低檢出濃度為0.15μg/ml和0.23μg/ml。23精密度試驗(yàn)取樣品測(cè)定項(xiàng)下配制的供試品溶液在一日內(nèi)不同時(shí)間0、2、4、8、12小時(shí)內(nèi)進(jìn)行HPLC分析測(cè)得日內(nèi)精密度和連續(xù)7日內(nèi)進(jìn)行HPLC分析測(cè)得日間精密度。結(jié)果大黃素和大黃酚在日內(nèi)RSD分別為2.3%和2.5%；日間RSD分別為2.5%和1.9%。見(jiàn)表1、2。表1日內(nèi)精密度（略）24加樣回收率試驗(yàn)取已知含量的大黃生藥材0.5g，分別加入對(duì)照品溶液適量，按樣品測(cè)定方法進(jìn)行測(cè)定。連續(xù)測(cè)得5次測(cè)得平均回收率分別為大黃素98.1%(RSD2.9%)、大黃酚

5、100.7%(RSD2.5%)，結(jié)果見(jiàn)表3、4。表3大黃素加樣回收率結(jié)果（略）表4大黃酚加樣回收率結(jié)果（略）3樣品的測(cè)定將樣品研成細(xì)粉，準(zhǔn)確稱取0.5g左右，置碘量瓶中加入甲醇30ml，超聲提取30分鐘，提取物過(guò)濾，溶劑減壓蒸干，殘?jiān)?ml甲醇溶解，經(jīng)微孔濾膜過(guò)濾后取10μl注入HPLC中，帶入回歸方程，用外標(biāo)法測(cè)定含量。同時(shí)，按藥典（2000版）附錄IXH水分測(cè)定法測(cè)定含水量。將樣品按樣品測(cè)定項(xiàng)下規(guī)定進(jìn)行測(cè)定，同時(shí)按藥典法（2000年版藥典一部第18頁(yè)）進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表5。表5HPLC法與藥典法測(cè)定結(jié)果（略

6、）4討論41藥材含量測(cè)定中提取劑的確定在樣品的預(yù)處理過(guò)程中，采用正交設(shè)計(jì)法對(duì)甲醇、乙醇等溶劑進(jìn)行考察，確定單組分甲醇為提取劑，同時(shí)對(duì)提取的時(shí)間和方法進(jìn)行考察，確定為超聲波提取30分鐘。42HPLC法中檢測(cè)波長(zhǎng)的確定本研究考察了大黃素和大黃酚的紫外圖譜發(fā)現(xiàn)在436nm處用梯度洗脫法分離樣品，樣品的分離度和檢測(cè)限均比較好，因此檢測(cè)波長(zhǎng)定為436nm。43HPLC法中線形范圍的確定本法的線形范圍是0.5μg~2.5μg，這個(gè)線形范圍是參考了大量的文獻(xiàn)和本法的最低檢測(cè)限確定的。大黃素和大黃酚屬弱酸性成分，流動(dòng)相呈弱酸性條

7、件下其保留行為得到改善，本研究考察了以0.04MNH4OAC(pH=2.8)和乙腈為流動(dòng)相,分離得到的峰形對(duì)稱,分離效果良好。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，本法結(jié)果可靠，與藥典法沒(méi)有顯著性差異，其最大的優(yōu)點(diǎn)是操作簡(jiǎn)單準(zhǔn)確。