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1、異丙酚對大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷細胞凋亡的影響論文【摘要】目的：研究異丙酚對大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷中細胞凋亡的影響.方法：SD大鼠60只，體質(zhì)量290~310g,隨機分為假手術(shù)組、異丙酚組和對照組，每組20只.用改良Longa法制成鼠腦缺血/再灌注模型（缺血2h，再灌2h）,光鏡下觀察細胞形態(tài)學變化，TUNEL法觀察細胞凋亡變化.結(jié)果：光鏡檢查異丙酚組細胞腫脹壞死明顯減輕，凋亡細胞及壞死細胞明顯減少.再灌2h后對照組凋亡細胞比率、凋亡細胞陽性率、TUNEL陽性率均較假手術(shù)組高(P0.01)，異丙酚組凋亡細胞陽性率、TUNEL陽性率較對照
2、組減少（P0.05）.結(jié)論：異丙酚能減輕大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷，具有抑制神經(jīng)細胞凋亡壞死的作用.【關(guān)鍵詞】二異丙酚；大鼠；腦缺血；再灌注損傷0引言異丙酚能降低腦血流量、腦耗氧量和顱內(nèi)壓,是臨床上腦損傷外科手術(shù)麻醉以及腦中風患者躁動鎮(zhèn)靜的常用藥物之一.研究證實,麻醉劑量異丙酚對實驗性大鼠腦缺血再灌注損傷有保護作用［1］,也有實驗發(fā)現(xiàn),鎮(zhèn)靜劑量異丙酚能明顯改善大鼠腦缺血的形態(tài)學變化［2］.其作用機制是多途徑、多位點的.freelL/L水合氯醛300mg/kg麻醉,頸部正中切口,分離左頸總動脈及其分叉處,凝斷頸外動脈(ECA)的3個主要分支,游
3、離ECA,兩端結(jié)扎,靠近遠心端將其剪斷,.freelm.此時大腦中動脈(MCA)起始處被阻斷,同時也阻斷了來自ICA,ACA,PCA的側(cè)副血流,導致MC區(qū)局部缺血，完成局灶腦缺血步驟.腦缺血成功的標志為動物蘇醒后出現(xiàn)同側(cè)的Horner征和對側(cè)以前肢為重的偏癱.缺血2h后撥出尼龍線恢復MCA血流,完成再灌注步驟.手術(shù)過程觀察呼吸節(jié)律,用加熱燈保持大鼠肛溫(37±0.5)℃.假手術(shù)組僅將尼龍線放入ECA,其他操作相同.異丙酚組于缺血前10min腹腔注入異丙酚100mg/kg（英國阿斯利康公司提供）.對照組于缺血前腹腔注入等容積生理鹽水.再灌注2h
4、后，開顱取腦，置入40g/L甲醛溶液中固定.1.2方法1.2.1細胞光鏡觀察灌注后2h后，斷頭取腦，以視交叉前后兩點冠狀切片，片厚約4mm，將腦片放入40g/L甲醛溶液中固定.常規(guī)梯度脫水、透明、包埋、浸蠟、切片厚6μm.HE染色，切片常規(guī)脫蠟至水，蘇木精染色5min，鹽酸乙醇分色30s，伊紅復染1~2min，水洗、脫水、透明、中性樹膠封片，觀察組織學變化.1.2.2細胞凋亡檢測（TUNEL法）原位末端標記細胞凋亡試劑盒由德國BoehringerMannheim公司提供.切片常規(guī)脫蠟至水，按試劑盒說明書操作，DAB顯色2~5min，蘇木素復染
5、、封片.于光鏡下觀察，TUNEL染色陽性并伴有核染色質(zhì)濃聚、核染色質(zhì)靠邊凝集或凋亡小體形成者為凋亡細胞；TUNEL染色陽性但呈彌漫著色為壞死細胞；TUNEL染色陰性為正常細胞.光鏡下隨機選取每張切片梗死周邊組織五個視野，分別計數(shù)每1000個細胞中TUNEL陽性、凋亡細胞、壞死細胞數(shù)，計算TUNEL陽性細胞的百分率.TUNEL陽性細胞百分率=TUNEL陽性細胞數(shù)/總細胞數(shù)×100%.凋亡細胞陽性率=凋亡細胞/（TUNEL陽性細胞+TUNEL陰性細胞），凋亡細胞比率=凋亡細胞/（凋亡細胞+壞死細胞）×100%.統(tǒng)計學處理：數(shù)據(jù)以x±s表示，應用S
6、PSS13.0統(tǒng)計軟件，采用非參數(shù)秩和檢驗分析組間差異.P0.05有統(tǒng)計學差異.2結(jié)果2.1形態(tài)學改變HE染色下，對照組相當于缺血中心區(qū)的頂葉、顳葉區(qū)神經(jīng)細胞染色淡，出現(xiàn)細胞腫脹，細胞核碎裂、溶解等細胞壞死特征（圖1A）.相當于缺血半暗帶的額葉皮質(zhì)等區(qū)神經(jīng)細胞數(shù)量減少、體積縮小，部分胞漿成嗜酸性改變，細胞間隙增寬，細胞核固縮，染色質(zhì)濃縮，邊聚.假手術(shù)組切片未出現(xiàn)上述變化.異丙酚組部分皮質(zhì)部神經(jīng)元結(jié)構(gòu)完整，壞死細胞和凋亡細胞減少（圖1B）.A：對照組；B：異丙酚組.圖1神經(jīng)細胞凋亡TUNEL×400（略）2.2細胞凋亡對照組皮質(zhì)和紋狀體都可見大
7、量凋亡細胞，核固縮、碎裂較多.假手術(shù)組未見凋亡細胞.異丙酚組部分細胞核固縮、可見核碎裂，部分細胞可見核仁，與對照組相比，凋亡細胞減少（P0.05，表1）.表1再灌注2h凋亡細胞比率、凋亡細胞陽性率和TUNEL陽性率（略）aP0.05vs對照，bP0.01vs假手術(shù).3討論異丙酚能減輕大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷，具有抑制神經(jīng)細胞凋亡壞死的作用.異丙酚能減輕大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷，具有抑制神經(jīng)細胞凋亡壞死的作用.缺血性腦損傷的機制研究已久，研究表明，在腦缺血前10min腹腔注射異丙酚100mg/kg，對大鼠腦缺血再灌注有保護作用［4］.近年來
8、的研究表明細胞程序性的死亡即細胞凋亡在缺血再灌注損傷中起了重要的作用，細胞凋亡是神經(jīng)細胞死亡的主要形式，重度長時間缺血引起神經(jīng)細胞壞死，輕度短時間缺血及再灌注可引起
