莪術(shù)對小鼠免疫功能影響的研究論文

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1、莪術(shù)對小鼠免疫功能影響的研究論文【關(guān)鍵詞】莪術(shù)；,,,小鼠；,,,白介素摘要：目的探討莪術(shù)對小鼠免疫功能的影響。方法用100%莪術(shù)對水煎液定期給小鼠連續(xù)灌胃10d，1次/d，檢測其對小鼠抗體產(chǎn)生能力、淋巴細(xì)胞增殖以及白介素2（IL-2）產(chǎn)生的影響。結(jié)果莪術(shù)對以上免疫學(xué)指標(biāo)均有明顯增強(qiáng)作用，與對照組比較有顯著性差異（P＜0.01）。結(jié)論莪術(shù)對小鼠免疫功能具有一定增強(qiáng)作用。關(guān)鍵詞：莪術(shù)；小鼠；白介素2；抗體生成能力；淋巴細(xì)胞Abstract:ObjectiveThisexperimentistodiscusstheinfluenceofZedorayonmouse'simmunefunctio

2、n.Methods1640為GIBCO分司產(chǎn)品；小牛血清為杭州四季青公司產(chǎn)品；LPS和ConA為美國Sigma公司產(chǎn)品；MTT為Fluca公司產(chǎn)品；二甲基亞砜（DMSO）購自上海生工生物工程分司；電泳儀；眼科手術(shù)器械等。1.1.2主要儀器Model450型酶標(biāo)儀（美國BIORAD分司）；CO2培養(yǎng)箱（丹麥HETO公司）；低速冷凍離心機(jī)（美國Beckman公司）；超凈工作臺（蘇州凈化設(shè)備廠）；100目不銹鋼網(wǎng)；50ml離心管等。1.1.3動物分組與給藥健康BALB/C小鼠24只，體質(zhì)量18~22g，雌雄各半，由濰坊醫(yī)學(xué)院動物中心提供。將動物隨機(jī)分為兩組，每組12只，Ⅰ組為生理鹽水對照組，Ⅱ組

3、為莪術(shù)處理組。Ⅰ組和Ⅱ組分別用生理鹽水和莪術(shù)原液灌胃，1次/d，0.5ml/（次/只），兩組持續(xù)灌胃共10d。1.2檢測指標(biāo)和方法1.2.1定量溶血分光光度測定法（QHS）本法用體外B細(xì)胞分泌的抗體裂解紅細(xì)胞所釋放的血紅蛋白量（OD值）表示，其結(jié)果可反映機(jī)體體液免疫功能。實(shí)驗(yàn)第5天分別將5%的綿羊紅細(xì)胞0.2ml注入各組小鼠腹腔內(nèi)，第11天眼球放血，頸椎脫臼處死小鼠，常規(guī)取脾臟，然后進(jìn)行脾細(xì)胞計(jì)數(shù)。調(diào)細(xì)胞濃度至1×109ml加1ml，取脾細(xì)胞1ml，1∶10新鮮豚鼠血清（補(bǔ)體）1ml，0.2%綿羊紅細(xì)胞（SRBC）1ml混勻，37℃水浴1h，1500r/min離心10min，以上清液于全自

4、動酶標(biāo)儀450nm波長處測OD值，作為QHS反應(yīng)值［2］。1.2.2淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)無菌制備小鼠脾細(xì)胞懸液，用RPMI1640不完全培養(yǎng)液洗滌3次，每次1500r/min離心10min，然后每含10%牛血清的完全培養(yǎng)液配成1×109ml，取100μl加入96孔細(xì)胞培養(yǎng)板，加入終濃度為5μg/ml的ConA，置37℃，5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48h后，無菌條件下加入MTT（5mg/ml）10μl孔，37℃5%CO2溫箱摻入4h，不再繼續(xù)培養(yǎng)12h，最后加入DMSO100μl，微量振蕩器充分震蕩后靜置20min，全自動酶標(biāo)儀用560nm波長進(jìn)行比色分析［3］。1.2.3小鼠腹腔巨噬細(xì)胞和IL-2

5、的誘生與檢測無菌制備小鼠脾細(xì)胞懸液：用RPMI1640不完全培養(yǎng)液洗滌2次，每次1000r/min離心10min，然后用含10%牛血清的完全培養(yǎng)液配成1×109ml，置細(xì)胞培養(yǎng)瓶中，37℃，5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)42h，離心收集上清液，置-20℃冰箱保存?zhèn)溆谩Ｖ苽浠罨钠⒘馨图?xì)胞：無菌取正常小鼠脾臟，制成1×109ml細(xì)胞懸液，加入ConA使其終濃度5mg/L，置37℃，5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48h，收集細(xì)胞，離心洗滌2次，用完全RPMI1640配成懸液作為檢測ⅠL2的反應(yīng)細(xì)胞。IL-2活性檢測：取-20℃冰箱保存的IL-2上清液，作1/2和1/4的稀釋，在96孔平底培養(yǎng)板中，每孔加入IL

6、-2上清液或不同稀釋度的IL-2上清液100μl以及上述反應(yīng)細(xì)胞100μl；陰性對照只加100μlRPMI1640培養(yǎng)液，各設(shè)4個復(fù)孔，于37℃，5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48h，每孔加MTT（5mg/ml）10μl，繼續(xù)培養(yǎng)4h，吸棄100μl上清液，補(bǔ)加入DMSO100μl，微量振蕩器充分振蕩后靜置20min，全自動酶標(biāo)儀用560nm波長進(jìn)行比色分析。1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，應(yīng)用SPSS10.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行方差分析和t檢驗(yàn)。2結(jié)果莪術(shù)對小鼠淋巴細(xì)胞增殖、抗體形成及IL-2產(chǎn)生均有促進(jìn)作用，與對照組比較有顯著性差異（P＜0.01）。具體結(jié)果見表1。3討論莪術(shù)為姜

7、科植物莪術(shù)、郁金或廣西莪術(shù)的根莖。味辛、苦、性溫、歸肝、脾經(jīng)，有行氣破瘀、消積止痛之功效，為臨床常用藥［1］?，F(xiàn)代研究證實(shí)，莪術(shù)的化學(xué)成分主要含揮發(fā)油，其成分為莪術(shù)呋喃烯銅、龍腦、莪術(shù)醇等，其藥理作用為抗腫瘤，增加動脈血流量以及抗早孕等［4，5］。臨床上主要用于治療積滯脹痛、血瘀腹痛、肝脾腫大、血滯經(jīng)閉、跌打損傷等疾病。國內(nèi)有學(xué)者應(yīng)用莪術(shù)治療小兒上呼道感染取得較好的治療效果［6］。表12組小鼠淋巴細(xì)胞增殖、抗體形成及IL