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1、齒瓣石斛多糖提取及脫蛋白工藝研究論文趙俊凌,馬潔,李戈,段立勝【摘要】目的通過正交實驗對齒瓣石斛多糖的提取工藝、脫蛋白條件進行優(yōu)化研究。方法采用苯酚-硫酸法考察提取溫度、提取時間及溶劑體積等因素對多糖提取的影響,采用比色法考察樣品與萃取劑體積比、萃取劑體積比、振蕩時間等因素對多糖脫蛋白的影響。結果多糖提取的最佳條件,提取溫度100℃,提取時間2h,加水量200ml,提取2次.freelin。結論苯酚-硫酸法簡單,易操作,可測定齒瓣石斛中多糖含量?!娟P鍵詞】齒瓣石斛;多糖;提取工藝;脫蛋白;正交實驗
2、石斛屬Dendrobium是蘭科中的第二大屬,全球共有約一千五百多種,主要分布于亞洲的熱帶和太平洋島嶼的東亞、東南亞及澳大利亞等地區(qū),我國有76種(74個種,2個變種)主要分布于華南及西南地區(qū)。石斛作為一種名貴中藥被《本草綱目》收錄,在《神農本草經》中也被列為上品,其有養(yǎng)胃生津、滋陰清熱、明目的功能,用于陰傷津虧,口干煩渴,食少干嘔,病后虛熱,目暗不明等癥狀?,F代藥理研究發(fā)現石斛屬植物具有抗腫瘤、免疫調節(jié)、抗氧化、抗血小板聚集、擴張血管、降低血糖等多種活性1,同時在治療胃腸道疾病和治療白內障方面也
3、有很好療效。齒瓣石斛DendrobiumdevonianumPaxt為石斛屬植物,又名紫皮石斛或紫皮蘭,主要分布于我國的云南、廣西、貴州等省,緬甸、越南、老撾、泰國也較多,具有“滋陰益胃,生津止渴”之功效。我國及許多其它亞洲國家一直把齒瓣石斛的莖當作生產楓斗的原料,主要用其當年生的幼嫩莖加工生產紫皮楓斗、細黃草,或者替代緊缺的鐵皮石斛生產鐵皮楓斗,產品銷售國內外,深得國內外消費者的青睞,其價格和質量僅次于鐵皮石斛。近年來其價格呈上升趨勢,鮮品價格已達160元/kg,而紫皮楓斗的價格也達到2000~
4、4000元/kg2。國內外對齒瓣石斛的藥理和化學成分的研究都相對較少。李滿飛等3報道了用比色法測定石斛多糖時測定了齒瓣石斛,其多糖含量為21.09%;熊麗萍等4報道了紫皮石斛14.27%,其水體液對超氧陰離子有抗氧化作用;吳剛等5報道了云南文山產齒瓣石斛的多糖含量37.05%;黎英等6報道了齒瓣石斛的水提物具有清除活性氧的活性;鄭志新等7報道了齒瓣石斛含有石斛多糖、礦質元素、氨基酸等有效成分。目前以齒瓣石斛(紫皮石斛)為主的產品較單一,具有很大的市場潛力。本實驗對齒瓣石斛多糖的提取及純化工藝進行研
5、究,為齒瓣石斛開發(fā)利用提供參考。1材料與儀器1.1材料齒瓣石斛Dendrobiumdevonianum產地為云南省,由中國醫(yī)學科學院藥用植物研究所云南分所王云強助理研究員鑒定。1.2試劑與儀器苯酚、濃硫酸、石油醚、無水乙醇、氯仿、正丁醇、丙酮、乙醚等均為分析純。旋轉蒸發(fā)器R-210(瑞士布奇),TU-1901新世紀紫外可見分光光度計(北京普析通用儀器有限責任公司),數顯恒溫水浴鍋HH-4(常州國華電器有限公司),GZX-9140恒溫數顯鼓風干燥箱(上海博訊設備有限公司),METTLERTOLEDO
6、系列分析天平AB135-S,PL203。2方法與結果2.1標準溶液配制3精密稱取105℃干燥恒重的標準葡萄糖100.0mg,置100ml容量瓶中,加蒸餾水適量使溶解,稀釋至刻度,搖勻。精密吸取10ml置100ml容量瓶中,用蒸餾水稀釋至刻度,每毫升含葡萄糖0.1mg。2.2檢測波長的選擇精密吸取標準葡萄糖溶液0.3ml,置于具塞比色管中,加蒸餾水至2.0ml,再加苯酚試液1.0,搖勻,迅速滴加濃硫酸5.0ml,蓋好塞子,迅速搖勻,放置5min,置沸水浴中加熱15min,取出,冷水迅速冷卻至室溫,作
7、為供試溶液。另以2.0ml蒸餾水同樣操作,作為空白對照,在400~600nm范圍對供試溶液進行掃描。葡萄糖溶液在490nm波長處有最大吸收度,齒瓣石斛多糖溶液在490.50nm波長處有最大吸收度,故選490.50nm作為樣品的測量波長。2.3標準曲線制作精取葡萄糖對照液,0.1,0.2,0.3,0.4,.freell,分別加入具塞比色管中,加蒸餾水使成2.0ml,各加苯酚試劑1.0ml,在旋轉混勻器上搖勻,迅速滴加濃硫酸5.0ml,搖勻,放置5min,置沸水浴中加熱15min,冷水迅速冷卻至室溫。
8、另以蒸餾水2.0ml同法操作,作為空白對照,在490nm處測其吸收度。以吸收度值為Y,葡萄糖濃度為X,得回歸方程:Y=0.00811+0.01731X,r=0.9995,說明該工作曲線在5.00~35.00μg間的線性良好。2.4精密度實驗精取供試溶液5份,每份0.3ml,加蒸餾水使成2.0ml,各加苯酚試劑1.0ml,按標準曲線操作,測定其吸收度。測定結果,葡萄糖RSD=1.23%,齒瓣石斛RSD=0.74%,精密度較好。2.5重復性實驗精取干燥后的樣品6份,分別提取,每份供試溶