非小細胞肺癌患者外周血ta,cea mrna和ck19 mrna檢測比較論文

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1、非小細胞肺癌患者外周血TA,CEAmRNA和CK19mRNA檢測比較論文龐桂芬盧云濤楊林瀛杜新生劉懷深薛承巖白海洋【摘要】目的:探討檢測非小細胞肺癌(NSCLC)患者血液中TA,CEAmRNA,CK19mRNA的臨床意義,評價三者診斷NSCLC血液轉(zhuǎn)移的應(yīng)用價值.方法:NSCLC組74例,非腫瘤性呼吸系統(tǒng)疾病患者(疾病對照組)51例和健康人(健康對照組)36例,應(yīng)用端粒末端重復(fù)序列擴增雜交酶聯(lián)免疫檢測技術(shù)檢測TA,逆轉(zhuǎn)錄套式聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)檢測CEAmRNA和CK19mRNA.結(jié)果:NSCLC組血液TA,CEAmRN

2、A和CK19mRNA陽性率高于兩個對照組(P0.01).freelRNA的特異性和敏感性也高于CK19mRNA,但不同類型NSCLC檢測3個指標結(jié)果的差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05).結(jié)論:檢測血液TA,CEAmRNA和CK19mRNA有助于發(fā)現(xiàn)NSCLC細胞血液轉(zhuǎn)移,且TA和CEAmRNA的價值高于CK19mRNA,但此3個指標可能無助于鑒別NSCLC的類型.【關(guān)鍵詞】癌非小細胞肺血液端粒末端轉(zhuǎn)移酶癌胚抗原角蛋白RNA信使0引言非小細胞肺癌(NSCLC)約占肺癌的70%以上,約50%多的NSCLC患者在最初診斷時已有遠處轉(zhuǎn)移

3、,預(yù)后較差.肺癌微轉(zhuǎn)移是肺癌的惡性標志和主要特征之一,也是導(dǎo)致治療失敗和患者死亡的主要原因.因此,明確腫瘤有無轉(zhuǎn)移,對治療決策的制訂、預(yù)后評估等具有重要的指導(dǎo)意義,早期診斷和治療肺癌微轉(zhuǎn)移是提高肺癌治療率、改善患者預(yù)后的有效途徑.至今,對NSCLC早期轉(zhuǎn)移、微轉(zhuǎn)移、血行轉(zhuǎn)移等的診斷仍沒有令人滿意的方法.研究提示,檢測血液中端粒酶活性(TA)和癌胚抗原信使核糖核酸(CEAmRNA)指標對了解NSCLC血液轉(zhuǎn)移有較大幫助,且作用優(yōu)于CK19mRNA.1對象和方法1.1對象我院住院NSCLC患者74(男47,女27)例,年齡37~

4、75歲,其中腺癌24例,鱗癌22例,腺鱗癌14例,大細胞肺癌14例.非癌性肺部疾病患者(疾病對照組)51(男29,女22)例,年齡16~76歲,包括間質(zhì)性肺炎9例,支氣管擴張9例,肺結(jié)核11例,肺囊腫11例,炎性假瘤11例.均經(jīng)手術(shù)或穿刺活檢病理證實診斷.健康志愿者(健康對照組)36(男20,女16)例,年齡18~75歲.對腫瘤患者及檢測指標陽性者通過通信、電話形式進行隨訪0.5~3a.應(yīng)用檸檬酸鈉抗凝劑真空采血管采集靜脈血液,分離、提取有核細胞,預(yù)冷生理鹽水充分洗滌有核細胞,以備檢測TA,CEAmRNA及CK19mRNA.

5、如不能即時檢測,應(yīng)盡快提取血液有核細胞,分裝后封存于-70℃.1.2方法應(yīng)用端粒末端重復(fù)序列擴增雜交酶聯(lián)免疫檢測技術(shù)(TRAPHybELISA)檢測TA,試劑盒為華美生物工程公司商品試劑盒.檢測操作經(jīng)過端粒酶催化端粒末端重復(fù)序列復(fù)制、PCR擴增、擴增產(chǎn)物微孔板雜交、酶聯(lián)免疫測定等步驟,于450nm波長測定各反應(yīng)孔A值,以檢測孔A值2.0倍陰性對照孔A值為端粒酶陽性結(jié)果.應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄套式聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)(RTNPPCR)檢測CEAmRNA和CK19mRNA,CEAmRNA檢測試劑盒為上海復(fù)星生物技術(shù)有限公司的商品

6、試劑盒,CK19mRNA檢測試劑盒由北京美迪科生物科技有限公司提供.操作經(jīng)RNA模板提取、逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA、套式PCR擴增、擴增產(chǎn)物瓊脂糖凝膠電泳、溴化乙啶染色、紫外檢測等步驟,以出現(xiàn)與試劑盒提供的陽性對照同齊的核酸電泳亮帶為陽性結(jié)果.實驗按試劑盒操作說明書進行.統(tǒng)計學(xué)處理:組間比較應(yīng)用χ2檢驗,同組內(nèi)兩種檢測結(jié)果比較應(yīng)用配對χ2檢驗法.2結(jié)果2.1外周血TA,CEAmRNA和CK19mRNA變化在疾病對照組,2例TA陽性結(jié)果分別來自肺結(jié)核和炎性假瘤;CEAmRNA陽性結(jié)果分別為肺結(jié)核2例,炎性假瘤1例;CK19mRNA的

7、陽性結(jié)果為肺結(jié)核2例,炎性假瘤2例,肺囊腫2例,間質(zhì)性肺炎1例.健康對照組的2例CK19mRNA陽性者,未見任何有意義的檢查及既往發(fā)現(xiàn),其中,1例于1,3,6,12mo后的4次復(fù)查均呈陰性結(jié)果,另1例于1,3,6,12mo后的4次復(fù)查中有1次(3mo后)呈陽性結(jié)果,其余均陰性.NSCLC組的各結(jié)果與兩個對照組比較,差別均有統(tǒng)計學(xué)意義(TA,CEAmRNA和CK19mRNA,與疾病對照組比較χ2=44.218,42.789和8.345;與健康對照組比較χ2=38.834,40.348和11.925,P0.01).在NSCLC組

8、內(nèi),TA與CEAmRNA的差別無統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=0,P0.05),雙陽性的有42例;TA與CK19mRNA的差別有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=12.960,P0.01),雙陽性的有26例;CEAmRNA與CK19mRNA的差別有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=16.409,P0.01,表1),雙陽性的有28例.

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