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《超聲酶法提取黃柏中小檗堿的工藝研究論文》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫。
1、超聲酶法提取黃柏中小檗堿的工藝研究論文【摘要】目的研究超聲酶法在黃柏中小檗堿提取中的應(yīng)用效果。方法采用單因素實(shí)驗(yàn)和正交實(shí)驗(yàn)考察不同因素對超聲酶法提取黃柏小檗堿的影響，優(yōu)選提取工藝條件。結(jié)果水浴時(shí)間2.5h,超聲功率80％,加酶25ml,水浴溫度60℃時(shí)提取率最高。結(jié)論超聲酶法應(yīng)用于黃柏小檗堿的提取，具有提取率高、省時(shí)、高效、節(jié)能等優(yōu)點(diǎn)。【關(guān)鍵詞】黃柏小檗堿纖維素酶超聲波ExtractionStudyofBerberinefromCortexPhellodendribyUltrasonic檸檬酸緩沖液（pH4.5），向各試管中加入0.5ml酶液，在其中一
2、支試管內(nèi)立即加入1.5ml3，5二硝基水楊酸終止酶作用，作為空白與另3支試管一起在50℃水浴鍋中保溫1h。取出后在后3支試管中加入3，5二硝基水楊酸，然后一起在沸水中煮沸5min，冷卻后定容至20ml。以空白液調(diào)零。在540nm下比色，由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出所測A值對應(yīng)的葡萄糖生成量。以上述條件，每小時(shí)由底物產(chǎn)生1μmol葡萄糖所需的酶量定義為1個(gè)酶活單位。2.1.5濾紙酶活力計(jì)算濾紙酶活力（U/g）依據(jù)公式：濾紙酶活力（U/g）=葡萄糖生成量（mg）×酶液定容總體積×5.56/［反應(yīng)液中酶液加入量（ml）×樣品重（g）×?xí)r間（h）］，1mg葡萄糖換算成μmol
3、：1000μg/180μg=5.56μmol,.freelg帶入公式得：濾紙酶活力=547.104U/g2.2小檗堿的提取及標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制2.2.1粗提將黃柏5g碎成粉狀，置燒杯中，加入1/10量的生石灰細(xì)粉，加水溶脹30min后，再加入30倍量水浸泡24h后紗布過濾，再用10%的鹽酸將濾液pH值調(diào)至2～3，然后加入濾液體積10%的NaCl，放置過夜后抽濾，得到鹽酸小檗堿的粗提物，此時(shí)還含有雜質(zhì)。將鹽酸小檗堿的粗提物用熱水溶解并趁熱抽濾，濾液冷卻靜止1h抽濾得到鹽酸小檗堿與掌葉防己堿等的混合物，至此黃柏的粗提完畢［2］。2.2.2鹽酸小檗堿標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制精密
4、稱取鹽酸小檗堿純品10mg，置50ml容量瓶中，加95%的乙醇溶解并定容至刻度，作為鹽酸小檗堿標(biāo)準(zhǔn)溶液。精密稱取此液0.2，0.4，0.8，1.6，2.0ml于50ml容量瓶中，繼續(xù)加95%乙醇至刻度并在348nm下測定吸光度值，y=0.8055x-0.0097。2.3纖維素酶-超聲波對鹽酸小檗堿提取率的影響取兩組黃柏各5g，粉碎。在一組樣品中加入150ml石灰水，在另一組中加入130ml石灰水和20ml濃度為5mg/ml的酶液。第一組樣品浸泡24h后雙層紗布過濾，第二組樣品在60℃，功率為60%的超聲波清洗器里超聲清洗90min后雙層紗布過濾，兩組濾液用1
5、0%的鹽酸調(diào)pH2～3，最后加入濾液體積10%的NaCl，放置過夜，抽濾，得兩組鹽酸小檗堿樣品。用乙醇溶解并分別定容至50ml，在348nm下分別測其吸光度值，并在鹽酸小檗堿標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出各自的鹽酸小檗堿。2.4提取條件的單因素考察2.4.1水浴溫度對提取效果的影響稱取干燥的黃柏粗粉5g左右，分別于20，40，60，80，100℃時(shí)加入20ml酶液，作用1.5h，結(jié)果在60℃時(shí)提取量比較高。2.4.2水浴時(shí)間的確定稱取干燥的黃柏粗粉5g左右，于60℃時(shí)加入20ml酶液，分別作用0.5，1.0，1.5，2.0，2.5h，結(jié)果水浴1.5h時(shí)提取量比較高。表2纖維
6、素酶-超聲波對鹽酸小檗堿提取率的影響（略）2.4.3加酶量的確定稱取干燥的黃柏粗粉5g左右，于60℃時(shí)加入酶液10，15，20，25，30ml，分別作用1.5h,結(jié)果加酶量為25ml時(shí)提取量比較高。2.4.4超聲功率的確定稱取干燥的黃柏粗粉5g左右，于60℃時(shí)加入酶液20ml，超聲時(shí)間1.5h，超升功率分別為40%，50%，60%，70%，80%，結(jié)果超聲功率范圍為60%時(shí)，提取量比較高。2.5正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)根據(jù)黃柏中鹽酸小檗堿的提取條件，選定加酶量、溫度、時(shí)間、超聲功率4個(gè)因素，以L9（34）正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)系統(tǒng)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。因素水平見表3,正交表見表4。表3因素及
7、水平（略）表4正交實(shí)驗(yàn)（略）以上分析可以得出結(jié)論:各因素對實(shí)驗(yàn)指標(biāo)(含量)的影響按大小次序來說應(yīng)當(dāng)是C(水浴時(shí)間)、D(超聲功率)、A(加酶量)、B(水浴溫度)，最好的實(shí)驗(yàn)方案應(yīng)當(dāng)是C3A2D3B2,即水浴時(shí)間2.5h,超聲功率80%,加酶25ml,水浴溫度60℃。2.6利用薄層色譜法檢測纖維素酶、超聲波對鹽酸小檗堿成分的影響制備硅膠薄層板一塊，取鹽酸小檗堿標(biāo)準(zhǔn)樣品、未用纖維素酶提取的鹽酸小檗堿樣品、用纖維素酶提取的鹽酸小檗堿樣品和用纖維素酶-超聲波提取的鹽酸小檗堿樣品各0.5μl，點(diǎn)樣。按CHCl3∶MeOH∶冰HAC=7∶1∶2的比例配制展開劑，將點(diǎn)樣后
8、的薄層板放入層析缸中，待展開至規(guī)定距離時(shí)取出晾干。在
