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《SYBR實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)人乳腺癌細(xì)胞.doc》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、SYBR實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)人乳腺癌細(xì)胞AnnexinⅡmRNA方法的建立及應(yīng)用郭變琴，黃學(xué)梅,吳立翔Δ（重慶市腫瘤研究所檢驗(yàn)科；重慶400032）摘要目的建立檢測(cè)人AnnexinⅡmRNA含量的SYBR實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法，并用其測(cè)定人乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231和MCF-7中AnnexinⅡmRNA水平。方法根據(jù)人AnnexinIImRNA的保守序列設(shè)計(jì)特異性引物，提取人乳腺癌細(xì)胞總RNA，并逆轉(zhuǎn)錄為cDNA，膠回收純化PCR產(chǎn)物,并與pGM-T載體連接構(gòu)建質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)品,進(jìn)一步通過SYBR實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)人乳腺癌細(xì)胞中AnnexinⅡmRNA水平。結(jié)果該方法標(biāo)
2、準(zhǔn)曲線的r2為0.997，融解曲線分析顯示單個(gè)峰，pGM-TAnnexinII質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)品高、低拷貝數(shù)的批內(nèi)、批間變異系數(shù)分別為6.2%，7.8%和9.1%和12.3%。進(jìn)一步的研究表明人乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231中AnnexinⅡmRNA顯著高于MCF-7(P<0.01)。結(jié)論建立的檢測(cè)人AnnexinIImRNA的SYBR實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法靈敏、特異且重復(fù)性好，并可用于乳腺癌細(xì)胞中AnnexinⅡmRNA的定量。關(guān)鍵詞:AnnexinⅡ；SYBR實(shí)時(shí)熒光定量PCR；乳腺癌細(xì)胞[中圖分類號(hào)]R737-9[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]ATheestablishmentandappli
3、cationofaSYBRrealtimefluorescencequantitativePCRfordetectionAnnexinIImRNAofhumanbreastcancercellsGUOBianqin，HUANGXuemei，WULixiang（ChongqingCancerInstitute，Chongqing400032）Abstract：ObjectiveToestablishaSYBRbasedrealtimefluorescencequantitativePCRmethodfordetectionhumanAnnexinIImRNAexpressio
4、n；anddetectAnnexinIImRNAinhumanbreastcancercells（MCF-7，MDA-MB-231.MethodsThespecificprimersweredesignedaccordingtotheconservedsequenceofhumanAnnexinIIgene.TotalRNAswereextractedfromhumanbreastcancercells(MCF-7，MDA-MB-231)，thentheRNAsweretranscribedreverselyintocDNAs.Theplasmidstandardswere
5、constructed.Thesensitivityandspecificityofthemethodwereevaluated.TherelativeexpressionlevelsofhumanAnnexinIImRNAinhumanbreastcancercellsweredetectedbythismethod.ResultsThesquaredofcorrelationcoefficientofthestandardcurveofthismethodwas0.997,meltingcurveanalysisshowedsinglepeak.Therelativee
6、xpressionlevelsofhumanAnnexinIImRNAinMDA-MB-231werehigherthanMCF-7(P<0.01).ConclusionsThemethodtodetectAnnexinIIbyrealtimefluorescencequantitativePCRwasgoodinsensitivity,specificityandlinearfunction.ItcanbeusedasastandardmethodofqRTPCRfordetectionofhumanAnnexinIIexpression.【Keywords】：Annex
7、inⅡ；SYBRrealtimefluorescencequantitativePCR；breastcancercellsAnnexinⅡ最早是作為Rous肉瘤病毒轉(zhuǎn)化基因的酪氨酸激酶底物于1982年被發(fā)現(xiàn)的，【1】屬于Annexins蛋白家族成員之一，是一種ca2+依賴的磷脂結(jié)合蛋白。目前研究表明，AnnexinII在多種惡性腫瘤中呈高表達(dá)【2-4】。本課題擬建立一種檢測(cè)人AnnexinⅡmRNA的SYBR實(shí)時(shí)熒光定量方法，進(jìn)一步檢測(cè)人乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231及MCF-7中AnnexinⅡmRNA水平，為深
