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1、中藥肝復(fù)健沖劑對大鼠肝纖維化形成的影響論文【關(guān)鍵詞】膠原InfluenceofGanfujiangranuleformulaonprocessofliverfibrosisinrat【Abstract】AIM:Toinvestigatetheeffectofganfujiangranuleoncollagensedimentinrathepaticfibrosisinducedbydiethylnitrosamine(DEN).METHODS:DENinducedlivefibrosismodelinistratedas
2、interventionmeasure.Influence(EFJgroup)ofganfujiangranuleoncollagensedimentandhepatocyteproliferationinedbyPicricacidSirusredstainingandimmunohistochemicalstaingmethods,andanalyzedbyputerimageanalysistechnique.RESULTS:Collagensedimentinratliverincreasedgraduallyo
3、del.Inflammatorydamageandthedegreeoflivercirrhosisodelgroup.Collagensedimentinliverandpositiveexpressionofproliferotivecellnumberontgen(PA)inhepatocytesent:4entinratliverandmaypreventlivercirrhosistransittohepatocarcinomainsomedegreebyinhibitoverproliferatingofhe
4、patocytes.【Keyedicine;livercirrhosis;collagen【摘要】目的：觀測中藥肝復(fù)健沖劑對二乙基亞硝胺（DEN）誘導大鼠肝纖維化形成的影響.方法：建立DEN誘導大鼠肝硬化模型，同時給予肝復(fù)健沖劑進行干預(yù)，應(yīng)用天狼紅苦味酸特染法、免疫組化染色法及計算機圖像分析技術(shù)檢測中藥對DEN致大鼠肝纖維化過程膠原沉淀及肝細胞增殖特性的影響.結(jié)果：隨著模型大鼠肝纖維化程度加重，肝內(nèi)膠原沉積量亦呈逐漸增加趨勢.中藥組大鼠肝臟炎性損害及肝纖維化程度均較同期模型組大鼠輕，膠原沉積量及細胞增殖核抗原(PA)陽性
5、著色肝細胞數(shù)明顯減少，兩組間差異有統(tǒng)計學意義,P0.05［膠原沉積量：4a公司.天狼紅（解放軍第475醫(yī)院贈送）.PA檢測試劑盒購自DAKO公司.中藥飼料：肝復(fù)健沖劑按30.4gkg-1均勻混合于基礎(chǔ)飼料中壓制而成（第四軍醫(yī)大學實驗動物中心提供）.1.2方法1.2.1模型建立大鼠適應(yīng)環(huán)境3d隨機分為模型組（Model）及中藥組(Ganfujian，GFJ)，每組各30只，分別以0.1gL-1DEN自由飲水，同時分別給予基礎(chǔ)飼料或含中藥的飼料喂養(yǎng).16.常規(guī)HE染色、切片膠原特殊染色及免疫組化染色.1.2.2切片膠原染色按
6、天狼紅飽和苦味酸法［4］.普通石蠟切片,厚4μm;常規(guī)脫蠟至水,0.1molL-1天狼紅飽和苦味酸,避光室溫孵育20min;不洗,950mLL-1乙醇脫水,二甲苯透明,封片.1.2.3PA免疫組織化學染色取材肝組織固定于100mLL-1緩沖甲醛溶液24h，常規(guī)石蠟包埋，切4μm厚切片，二甲苯、梯度乙醇脫蠟至水；染色方法為免疫ABC法.以0.1molL-1PBS取代一抗作陰性對照，以正常大鼠肝組織作正常對照.1.2.4染色結(jié)果判定及計算機圖像分析肝臟背景為淡黃色，膠原陽性著色呈紅色,采用HPIAS1000高清晰度彩色病理圖
7、文分析系統(tǒng),隨機選擇5個匯管區(qū)進行染色膠原的定量分析(面積占視野面積),取其均值.PA陽性著色為覆蓋胞核的棕黃色顆粒.用網(wǎng)格（10×10）測試法計數(shù)陽性肝細胞.切片各選擇10個按同一方向移行、不重疊的高倍鏡視野（×40），記數(shù)陽性及陰性細胞數(shù)（100個細胞）.統(tǒng)計學處理：采用SPSS統(tǒng)計分析軟件對所獲得的數(shù)據(jù)進行組間秩和檢驗.2結(jié)果2.1大鼠肝纖維化過程組織形態(tài)學變化模型組大鼠使用DEN4~8edicaltreatment［J］.Guoonitoringofhighriskpopulationsoflivercancer
8、［J］.Guoentalstudyofhistologicalquantitativemethodindiagnosinghepaticfibrosis［J］.ZhongxiyiJieheGanzangbingZazhi(chinandcarbonatetoAflatoxinB1inducedhepatocarcin
