牡丹皮乙醇提取工藝研究

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1、牡丹皮乙醇提取工藝研究【摘要】目的：探討牡丹皮提取工藝的最佳條件。方法：采用正交實驗法，以芍藥苷含量為指標(biāo)，用高效液相法測定。結(jié)果：提取次數(shù)和乙醇濃度對提取效果有非常顯著性和顯著性影響。結(jié)論：最佳工藝條件為5倍量75%的乙醇提取3次，每次1h?！娟P(guān)鍵詞】牡丹皮；正交設(shè)計；提取工藝；芍藥苷；高效液相色譜法　　牡丹皮為毛茛科植物牡丹(PaeoniasuffruticosaAndr.)的干燥根皮，具有清熱涼血，活血化瘀的功效。牡丹根皮中含芍藥苷、氧化芍藥苷、苯甲酰芍藥苷、丹皮酚、丹皮酚苷、丹皮酚原苷和丹

2、皮酚新苷等成分。藥理實驗表明，芍藥苷體內(nèi)、體外均能抑制ADP或膠原誘導(dǎo)的血小板聚集〔1〕，應(yīng)屬牡丹皮抗缺血性中風(fēng)的主要有效成分之一。本文采用正交實驗法，以HPLC法測定的芍藥苷的提取量為指標(biāo)，對牡丹皮乙醇提取工藝進(jìn)行優(yōu)選，為牡丹皮的開發(fā)應(yīng)用提供了實驗依據(jù)。　　1儀器和試藥　　　　高效液相色譜儀：日本島津10Avp高效液相色譜儀(LC10Atvp雙泵，SPDM10Avp二極管陣列檢測器，SIL10Advp自動進(jìn)樣器，CTO10Avp柱溫箱);HypersilODS填料色譜柱(ID4.6×25

3、0mm)(大連依利特化學(xué)儀器有限公司);分析天平：LIBRORL16ODTP分析天平(日本島津)、AE240分析天平(瑞士METTLER);芍藥苷對照品(07369710)：中國藥品生物制品檢定所(為含量測定用)。牡丹皮藥材(購自四川省電江藥材基地，經(jīng)鑒定為牡丹皮正品)，所用乙腈為色譜純，其余試劑為分析純?！　?提取工藝研究　　2.1方法本文采用乙醇加熱回流法對牡丹皮進(jìn)行提取，選擇回流次數(shù)、乙醇濃度、回流時間和乙醇用量等4個主要影響因素，每個因素選取3個水平。選用L9(34)正交實驗法進(jìn)行實驗

4、，選定的因素水平表見表1。　　表1因素水平表（略）　　2.1.1色譜條件經(jīng)試驗，確定流動相為乙腈水(20：80)，流速1ml/min，柱溫40℃，測定波長為230nm進(jìn)樣量4μl?！　?.1.2對照品溶液的制備精密稱取芍藥苷對照品2.40mg，置25ml量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得(每1ml中含芍藥苷96μg)?！　?.2供試樣品溶液的制備精密稱取9份牡丹皮藥材粗粉50g，按L9(34)表各試驗號規(guī)定方法進(jìn)行實驗，提取液分別濃縮并轉(zhuǎn)移至100ml容量瓶，用適量乙醇稀釋至刻度，搖勻，

5、靜置，即得樣品溶液。精密吸取上述樣品溶液各1ml，分別置25ml容量瓶中，用乙醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，即得供試樣品溶液?！　?.3供試樣品溶液測定及結(jié)果精密吸取供試樣品溶液與對照品溶液各4μl，注入液相色譜儀，測定，計算出供試樣品溶液中芍藥苷的濃度，結(jié)果見表2；方差分析見表3。　　表2正交試驗設(shè)計及結(jié)果（略）　　由以上結(jié)果可知，牡丹皮乙醇提取的最佳工藝條件確定為A3B2C1D1，即5倍量75%乙醇提取3次，每次1h?！　”?方差分析（略）　　3小結(jié)　　3.1芍藥苷為牡丹皮中主要活性成分之一，其含

6、量測定方法較多，如毛細(xì)管區(qū)帶電泳法〔2〕，薄層掃描法〔3〕，高效液相色譜法〔4-5〕等。筆者采用HPLC法進(jìn)行實驗，并進(jìn)行了相應(yīng)的方法學(xué)試驗。結(jié)果表明本法各方面符合中華人民共和國藥典(2005版)和中藥新藥研制的有關(guān)規(guī)定。在試驗中，根據(jù)牡丹皮含量測定結(jié)果，制定了牡丹皮中芍藥苷的含量限度，為控制實驗用牡丹皮藥材的質(zhì)量提供了依據(jù)。本文所選含量測定方法操作簡單，結(jié)果準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好?！　?.2關(guān)于芍藥苷含量測定方法中流動相的選擇，曾選用乙腈水(10：90、20：80、30：70)和甲醇水(20：80、

7、30：70、40：60)等依次進(jìn)行實驗，結(jié)果顯示乙腈水(20：80)作流動相時，牡丹皮供試品色譜中芍藥苷與雜質(zhì)峰可達(dá)基線分離，峰形對稱，且保留時間適宜，故采用乙腈水(20：80)作為流動相?！　?.3有文獻(xiàn)記載以水提醇沉法提取丹皮中芍藥苷〔6〕，但考慮到芍藥苷醇溶性優(yōu)于水溶性，在前期實驗中經(jīng)比較，水提醇沉提取物中芍藥苷得率低于乙醇提取物，且其操作較繁，故本文直接采用乙醇提取法，正交實驗得出最佳提取工藝條件為乙醇濃度75%，乙醇用量為藥材量的5倍，加熱回流時間為1h，回流次數(shù)為3次。　　致謝；河

8、南省駐馬店市藥品檢驗所【