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《補(bǔ)骨脂湯對癡呆大鼠海馬nr2b、bdnf-trkb表達(dá)的影響論文》由會員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫。
1、補(bǔ)骨脂湯對癡呆大鼠海馬NR2B、BDNF/TrkB表達(dá)的影響論文鄭里翔，崔志遠(yuǎn)，郭慧君，余世平【摘要】目的為探討補(bǔ)骨脂湯對改善血管性癡呆大鼠的空間學(xué)習(xí)記憶的機(jī)理。方法用雙側(cè)結(jié)扎頸動脈反復(fù)灌注，用Morris試驗測試大鼠的空間學(xué)習(xí)記憶，RT-PCR測定與學(xué)習(xí)記憶密切相關(guān)的NR2B、BDNF/TrkB基因表達(dá)產(chǎn)物。結(jié)果補(bǔ)骨脂湯高、低劑量組的逃避潛伏期都明顯短于模型組（P0.01），補(bǔ)骨脂湯高、低劑量，均可明顯提高NR2B、BDNF/TrkBmRNA表達(dá)（P0.05）。結(jié)論補(bǔ)骨脂湯能明顯改善血管性癡呆大鼠的空間記憶
2、.freelRNA表達(dá)水平而發(fā)揮作用的。【關(guān)鍵詞】補(bǔ)骨脂湯；血管性癡呆；NR2B；BDNF/TrkBmRNAAbstract：ObjectiveToelucidatethemechanismofBuGuZhiDecoctionhoprovevasculardementiaratsonspatiallearningandmemory.MethodsExperimentalVDmodelratsoncarotidarteriesligationandreperfusion,theperformanceofspat
3、iallearningandmemoryofallratseasuredusingtheMorrisaze.DAR2、BDNF/TrkB基因表達(dá)產(chǎn)物入手，進(jìn)一步闡明作用途徑，為其臨床應(yīng)用提供實(shí)驗依據(jù)。1材料與儀器1.1動物實(shí)驗動物選用SD大鼠60只(購于南昌大學(xué)醫(yī)學(xué)院動物中心)，雌雄各半，體質(zhì)量160～180g。1.2中藥由江西中醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院藥房提供。1.3儀器及試劑水迷宮實(shí)驗裝置，PCR擴(kuò)增儀,核酸電泳槽，DPG-900型凝膠圖像分析系統(tǒng)，凈化臺，DYY-5型電泳儀。Trizol及Taq酶均自美國Invi
4、trogen公司，其他化學(xué)試劑都是國產(chǎn)試劑。2方法2.1分組把60只大白鼠隨機(jī)分成5組，每組雌雄各半，分別為假手術(shù)組，模型組，中成藥組，補(bǔ)骨脂湯低劑量組，補(bǔ)骨脂湯高劑量組。2.2造模在造模前補(bǔ)骨脂湯高、低劑量組用補(bǔ)骨脂湯灌胃7d，第8天對5組進(jìn)行手術(shù)造模，用2﹪的戊巴比妥鈉40mg/kg腹腔注射麻醉，75﹪酒精消毒頸前皮膚，頸正中切口分離雙側(cè)頸總動脈穿線備用，用無創(chuàng)動脈夾夾閉一側(cè)頸總動脈10min,去夾后立即關(guān)閉另一側(cè)頸總動脈，每側(cè)夾閉1次，每次10min，去動脈夾撤線縫合皮膚，在手術(shù)部位撒一層青霉素粉末。假
5、手術(shù)組只進(jìn)行頸總動脈的分離不夾閉血管，各組手術(shù)造模后待大鼠蘇醒然后放回籠中保溫飼養(yǎng)。2.3給藥方法術(shù)后第3天開始給藥，中成藥組劑量予銀杏葉片7.2mg/(kg·d),補(bǔ)骨脂湯低劑量組劑量予9.82mg/(kg·d)，高劑量組劑量予19.64mg/(kg·d)，2次/d，連續(xù)25d。2.4Morris實(shí)驗將大鼠面向池壁置于象限1/2弧度處入水，經(jīng)120s未找到站臺的大鼠，將其引至站臺停留10s,引導(dǎo)其學(xué)習(xí)記憶，各組大鼠每天訓(xùn)練2次，共訓(xùn)練6d，記錄大鼠找到平臺的確切時間。在整個實(shí)驗中，實(shí)驗者要與動物視線隔開，室
6、內(nèi)要保持安靜及周圍環(huán)境的相對穩(wěn)定。2.5半定量的RT-PCR按照TRIZOL試劑說明書提取總RNA，在20μl反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)體積中進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄，合成cDNA。取上述逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物PCR擴(kuò)增NR2B、BDNF、TrkB。NR2B：Forer:5’GCTCAGCGACCTGTATGG3’，Reverseprimer:5’AGGCGAGTTCTCCTTTGTT3’，產(chǎn)物長度331bp；BDNF：Forer:5’TTATTTCATACTTCGGTTGC3’，Reverseprimer:5’ATGGGATTACACATTGGTC
7、TC3’,產(chǎn)物長度547bp；TrkB：Fore:5’GGCTTATGCTTGCTGGTC3’,Reverseprimer:5’CTGGGTCAATGCTGTTAGGT3’,產(chǎn)物長度148bp。25μlPCR反應(yīng)體系中進(jìn)行PCR反應(yīng)（NR2BmRNA、BDNFmRNA、TrkBmRNA:95℃5min,94℃30s,53℃20s,.freelin；GAP-43mRNA：95℃5min,94℃30s,55℃20s,72℃30s,30個循環(huán)，72℃終延伸5min）。PCR產(chǎn)物用2﹪瓊脂糖凝膠溴化乙錠電泳分離，用凝
8、膠圖形分析系統(tǒng)進(jìn)行拍照，觀察結(jié)果并測定灰度值，以擴(kuò)增的目的條帶和同時擴(kuò)增的β–actin的灰度值比對各基因轉(zhuǎn)錄水平進(jìn)行衡量。2.6統(tǒng)計學(xué)處理數(shù)據(jù)采用±s表示，應(yīng)用應(yīng)用SPSS15．0統(tǒng)計軟件，組間比較采用方差分析及q檢驗。3結(jié)果3.1補(bǔ)骨脂湯對血管性癡呆大鼠空間學(xué)習(xí)記憶的影響給藥30d后，進(jìn)行Morris實(shí)驗，結(jié)果見表1，從表1數(shù)據(jù)可以看出，各大鼠在游泳測試中，其逃避潛伏期都隨游泳天數(shù)的增加逐漸下降
