抗性淀粉和總淀粉測定方法

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1、WORD完美格式抗性淀粉及總淀粉測定方法采用Megazyme抗性淀粉試劑盒法，測定方法見試劑盒說明書（下附）原理（AOAC法2002.02;AACC法32-40）抗性淀粉的測定方法：樣品使用α-胰淀粉酶和淀粉葡糖苷酶（AMG）37℃振蕩水浴孵育16小時，在這期間，通過兩種酶的聯(lián)合作用，非抗性淀粉被溶解，水解成D-葡萄糖，孵育結(jié)束后，加入等體積的乙醇或工業(yè)甲基化酒精（IMS,變性乙醇）終止反應(yīng)。離心上述溶液，收集上清勿棄，底部殘留絮狀團即為樣品中的RS，用含水的IMS或乙醇（50%v/v）洗滌絮狀團，洗滌后離心，再重復(fù)一次洗滌離心，收集離心后獲得的上清，與之前收集的

2、上清混合。小心倒出試管殘留的液體，將絮狀團置于冰水浴中，加入2MKOH溶解，溶解的同時用磁力攪拌機劇烈攪拌。用醋酸鹽緩沖液將這個溶液調(diào)至中性，用AMG將淀粉定量水解成葡萄糖。D-葡萄糖用葡糖氧化酶/過氧化物酶試劑（GOPOD）測定，這也是對樣品中RS含量的測定。非抗性淀粉（可溶性淀粉）的測定可通過集中的上清液并定容至100mL，再用GOPOD測定D-葡萄糖完成。總淀粉測定方法：即抗性淀粉與非抗性淀粉總和。抗性淀粉檢測試劑盒K-RSTAR（100次分析）應(yīng)用性和精確性這個方法需要樣品中RS含量多于2%w/w。如RS含量多于2%w/w，常規(guī)標(biāo)準(zhǔn)誤差為±5%。少于2%w

3、/wRS的誤差更高。試劑盒瓶子1：淀粉葡糖苷酶AMG，12mL，3300U/mL，條件為pH4.5，40℃下，底物為可溶性淀粉，[單位或為200U/mL，條件為pH4.5，40℃下，底物為對硝基苯基β-麥芽糖苷]。AMG溶液應(yīng)完全沒有可檢測到的游離D-葡萄糖。4℃下穩(wěn)定性>3年。瓶子2：α-胰淀粉酶(胰酶，10g，3CeralphaU/mg)。4℃下穩(wěn)定性>3年。瓶子3：GOPOD試劑緩沖液。磷酸鉀緩沖液（1M，pH7.4），對羥基苯甲酸（0.22M技術(shù)資料專業(yè)整理WORD完美格式）和疊氮化鈉（0.4%W/V）。4℃下穩(wěn)定性>3年。瓶子4：GOPOD試劑酶。葡糖氧

4、化酶（>12,000U）加上過氧化物酶（>650U）和4-氨基安替比林（80mg）。凍干粉，-20℃下穩(wěn)定性>5年。瓶子5：D-葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液（5mL,1.0mg/mL）溶于苯甲酸0.2%（w/v）。室溫下穩(wěn)定性>5年。瓶子6：抗性淀粉對照?？剐缘矸酆咳绫硭尽Ｊ覝叵路€(wěn)定性>5年。溶液/懸浮液的制備1.使用瓶子1中提供的的產(chǎn)品（AMG；溶液1）。這個溶液是有粘性的，因此應(yīng)使用正向移液器移取分裝。4℃下穩(wěn)定性>3年。稀釋AMG（300U/mL）。取2mL瓶子1中的AMG濃縮液用0.1M順丁烯二酸鈉緩沖液（0.1M，pH6.0；試劑1，非提供）稀釋至22mL。以5m

5、L為單位分裝后用聚丙烯管冷凍保存。反復(fù)凍融不會影響穩(wěn)定性，穩(wěn)定性-20℃>5年。用前制備2.用100mL順丁烯二酸鈉緩沖液(100mM，pH6.0；試劑1，非提供)懸浮1g瓶子2中的產(chǎn)品(α-胰淀粉酶)，攪拌5分鐘。加入1.0mL稀釋的AMG（300U/mL），混勻。>1500g離心10分鐘，慢慢倒出上清液，這就是制備的溶液2。溶液2制備后應(yīng)當(dāng)天使用。3.用蒸餾水稀釋瓶子3中的產(chǎn)品（GOPOD試劑緩沖液）稀釋至1L，這就是制備的溶液3。制備后馬上使用。備注：（1）如果濃縮緩沖液在-20℃下儲存，它將形成結(jié)晶鹽，因此必須要完全溶解才可以用蒸餾水稀釋。（2）這個緩沖液

6、包含0.4%（w/v）的疊氮化鈉。因此這是個有毒化學(xué)物，應(yīng)進(jìn)行相應(yīng)的處理。4.取瓶3中制備好的溶液320mL溶解瓶子4里全部的產(chǎn)品，定量轉(zhuǎn)移這個溶液至裝有剩余溶液3的瓶子中。用鋁箔封蓋瓶子以遮光。這就是葡萄糖測定試劑（GOPOD試劑），可以在2-5℃保存3個月或者-20℃下保存一年。如果試劑要以冷凍態(tài)儲存，應(yīng)分裝后再凍存。當(dāng)試劑是新鮮制備的，它的顏色應(yīng)是淺黃色或淺粉色。在4℃技術(shù)資料專業(yè)整理WORD完美格式儲存2-3個月時會演變成深粉色。當(dāng)以蒸餾水為對照時，這個溶液的吸光度應(yīng)小于0.05。5&6.使用瓶子5或6提供的產(chǎn)品。室溫下穩(wěn)定性>5年。沒有提供的試劑（應(yīng)購買

7、分析純級）1.順丁烯二酸鈉（馬來酸鈉）緩沖液(100mM，pH6.0)加上5mM二水氯化鈣和疊氮化鈉（0.02%w/v）.用1600mL蒸餾水溶解23.2g順丁烯二酸，用4M（160g/L）氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH至6.0，加入0.74g二水氯化鈣和0.4g疊氮化鈉，并溶解。定容至2L。4℃下可保存一年。2.醋酸鈉緩沖液（1.2M，PH3.8）將69.6mL的冰醋酸（1.05g/mL）加至800mL的蒸餾水中，用4M氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH至pH3.8。用蒸餾水定容至1L，室溫下可保存一年。3.醋酸鈉緩沖液（100mM，PH4.5）將5.8mL的冰醋酸加至900mL的蒸餾水中，用

8、4M氫氧化