探討ape1在卵巢上皮性癌中的表達及其臨床意義

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1、探討APE1在卵巢上皮性癌中的表達及其臨床意義摘要：目的：探討脫嘌呤/脫嘧啶核酸內(nèi)切酶（APE1）基因在卵巢上皮性癌中表達的相關性及其意義.方法：應用免疫組織化學檢測10例正常卵巢、20例卵巢良性腫瘤、15例卵巢交界性腫瘤和120例卵巢上皮性癌組織中APE1的表達，并分析其與臨床病理因素之間的關系.結(jié)果：卵巢癌組織中APE1呈胞核表達、單純胞質(zhì)表達或核質(zhì)共同表達，胞質(zhì)異位表達率（57.5%）明顯高于正常卵巢組織和良性卵巢腫瘤.APE1胞質(zhì)表達與卵巢癌病理類型、腫瘤分化程度和FIGO分期有關（P<0.05

2、）.APE1胞核表達的化療有效率為77.4%，高于APE1胞質(zhì)異位表達53.8%，APE1胞核表達的卵巢癌患者預后要優(yōu)于APE1胞質(zhì)異位表達的卵巢癌患者（P<0.05）.結(jié)論：APE1表達在卵巢癌的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要作用，APE1的亞細胞定位對卵巢癌化療的療效和預后有一定臨床應用前景.關鍵詞：卵巢腫瘤；脫嘌呤/脫嘧啶核酸內(nèi)切酶；DNA損傷；免疫組織化學0引言卵巢癌是較常見的女性生殖系統(tǒng)腫瘤，惡性程度高，近年來其發(fā)生率在國內(nèi)外呈上升趨勢.尋找敏感性高、特異性強的腫瘤標記物是卵巢癌診治中急待解決的問題.脫嘌

3、呤/脫嘧啶核酸內(nèi)切酶1(apurinic/apyrimidinicendonuclase，APE1)，是DNA堿基切除修復途徑的關鍵酶，主要負責DNA損傷中最常見的脫嘌呤/脫嘧啶(apurinic/apyrimidinic，AP)位點［1］.有研究［2-3］報道，APE1在多種腫瘤組織中高表達，但APE1在卵巢癌組織中的表達還少見報道.我們采用免疫組織化學技術檢測原發(fā)性卵巢癌手術標本中APE1的表達特點，旨在從臨床病理角度探討APE1在卵巢癌發(fā)生發(fā)展中的作用.1對象和方法1.1對象選擇第四軍醫(yī)大學西京醫(yī)院和第

4、三軍醫(yī)大學大坪醫(yī)院199801/200701經(jīng)手術確診的卵巢上皮癌初治患者120例，年齡19～81（平均47.2）歲，其中漿液性囊腺癌54例，粘液性囊腺癌35例，子宮內(nèi)膜樣癌7例，未分化腺癌24例.細胞學分級：高分化癌19例，中分化癌68例，低分化癌33例.按國際婦產(chǎn)科聯(lián)盟（FIGO)2003年手術病理分期標準進行分級，其中I期23例，Ⅱ期11例，Ⅲ期73例，Ⅳ期13例.另取良性卵巢腫瘤20（漿液性囊腺瘤10，粘液性囊腺瘤10）例，年齡23～67（平均43.6）歲，交界性腫瘤15例，21~62（平均38.

5、7）歲和正常卵巢組織10例，年齡38～63（平均46.4）歲作為對照.所有標本均經(jīng)40g/L甲醛固定，常規(guī)石蠟包埋，HE染色后再次復核診斷.濃縮型APE1兔抗人mAb，工作濃度為1∶5000（美國NovusBiologicals公司）；SP免疫組化試劑盒和DAB顯色試劑盒（北京中杉金橋生物技術公司）；ImageproPlus5.1圖像分析系統(tǒng)（美國MediaCybericsInc公司）.1.2方法1.2.1免疫組織化學染色采用SP二步法進行檢測.選取組織蠟塊進行連續(xù)切片，片厚4μm，60～80℃烤片2

6、0min，常規(guī)脫蠟，乙醇梯度水化，30mL/LH2O2甲醇封閉內(nèi)源性過氧化物酶活性，室溫10min，PBS(pH7.2～7.6)洗3次，每次5min.將切片浸入0.01mol/L檸檬酸緩沖液(pH6.0)，微波爐加熱至沸騰后斷電，間隔5min后重復1次，PBS洗3次，每次5min.滴加5mL/L正常山羊血清封閉10min，滴加1∶5000稀釋的APE1一抗，濕盒內(nèi)4℃冰箱保存過夜，滴加Pou;L，37℃孵育30min，DAB顯色，蘇木素復染.采用磷酸鹽緩沖液代替一抗作為免疫染色陰性對照，采用已知APE陽性的

7、骨肉瘤標本作為陽性對照.1.2.2結(jié)果判定光學顯微鏡下觀察，免疫陽性信號為棕黃色細小顆粒.每張切片隨機選取5個具有代表性的視野（400倍），用ImageproPlus5.1圖像分析系統(tǒng)自動選取陽性區(qū)域并計算積分吸光度值，評價APE1蛋白表達水平.將出現(xiàn)APE1單純胞質(zhì)表達與核質(zhì)共表達統(tǒng)稱為胞質(zhì)異位表達.1.2.3療效評價將120例卵巢癌患者中滿足下列條件的病例納入評價對象：①卵巢癌初治患者；②術后給予以鉑類為基礎的規(guī)范化療，不少于6個療程（3eier法繪制生存曲線.P＜0.05為差異具有統(tǒng)計學意義.2結(jié)果2

8、.1APE1在正常卵巢組織、良性卵巢腫瘤、交界性卵巢癌腫瘤和卵巢癌組織中的表達正常卵巢組織和良性卵巢腫瘤中APE1呈胞核表達，交界性卵巢腫瘤APE1亦呈胞核表達，個別存在胞質(zhì)表達；而卵巢上皮癌組織APE1呈胞核表達、胞質(zhì)表達或核質(zhì)共同表達(P<0.05，圖1).卵巢癌組織中APE1胞質(zhì)異位表達率為57.5%，卵巢交界性腫瘤組織中APE1胞質(zhì)異位表達率為13.3%，兩者差異無統(tǒng)計學意義(P>