外燥對小鼠肺組織水通道蛋白1表達(dá)的影響論文

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1、外燥對小鼠肺組織水通道蛋白1表達(dá)的影響論文丁建中，張六通，李軍川，胡利群，張燕翔【摘要】目的觀察外燥對小鼠肺組織水通道蛋白1(AQP1)表達(dá)的影響。方法60只SPF級昆明種小鼠隨機(jī)分為常溫常濕組、常溫燥組、溫燥組、涼燥組，每組15只。圖像分析免疫組化法之各組第6天、第12天，第18天小鼠肺組織AQP1陽性表達(dá)率。結(jié)果各組AQP1陽性表達(dá)部位多在肺泡上皮處;溫燥組第12天、第18天AQP1蛋白表達(dá)陽性率持續(xù)下降，涼燥組也呈同樣趨勢.freelice.Methods60Kunmingmice(SPF)al)，g

2、roupB(normaltemperatureandexternaldryness),groupC(-Dry),groupD(Cool-Dry),15miceineachgroup.TheexpressionofAQP1embraneedgesofalveoli,andthepositiveratesofAQP1ingroupCandDarkablylomationsoflung.ConclusionThedeareaseofAQP1expressionisrelatedageofalveoliinexte

3、rnaldryness.Key)、D-葡萄糖醛酸內(nèi)酯(2711EC，Sigam)，其余試劑均為分析純。1.2動物無特定病原體級(SPF)昆明種小鼠60只，體質(zhì)量(17±1)g，雌雄各半，湖北省實(shí)驗(yàn)動物研究中心提供，許可證號：SCXK(鄂)2008-2005。2方法2.1動物分組與造模60只昆明種小鼠隨機(jī)分為常溫常濕組、常溫燥組、溫燥組和涼燥組，每組15只，置人工氣候箱內(nèi)常規(guī)飼養(yǎng)，按文獻(xiàn)造模4。處理后第6天、第12天、第18天檢測相關(guān)項(xiàng)目。小鼠實(shí)驗(yàn)前4h常規(guī)禁食、禁水。2.2普通病理組織學(xué)觀察斷頸處死小鼠，取

4、右肺中葉組織2cm×2cm，常規(guī)HE染色，鏡檢。2.3AQP1蛋白表達(dá)檢測采用免疫組織化學(xué)法。取各組第6天、第12天、第18天小鼠右肺組織(0.5cm×0.5cm)，常規(guī)固定、包埋切片，微波法熱修復(fù)抗原，依次滴加羊抗鼠AQP1多克隆抗體、生物素化兔抗羊二抗和SABC，DAB顯色，蘇木素襯染、透明封片。光鏡下以肺泡周圍及肺泡上皮出現(xiàn)棕色顆粒為陽性，JEDA80ID圖像分析軟件計(jì)算AQP1陽性表達(dá)“平均灰度”與“異形指數(shù)”，并按下式計(jì)算：AQP1表達(dá)陽性率(%)=肺組織AQP1陽性染色面積/肺組織總面積×100

5、%2.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以±s表示，采用SPSS13.0軟件，資料之間比較用ANOVA分析，顯著性檢驗(yàn)采用多個(gè)樣本均數(shù)間q檢驗(yàn)(Nean-Keuls法)，P0.05認(rèn)為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，檢驗(yàn)水準(zhǔn)為雙側(cè)α=0.05。3結(jié)果3.1病理觀察常溫常濕組各期無異常，常溫燥組第12天肺部輕度充血;溫燥組、涼燥組第6天肺泡充血、肺泡隔增厚與炎性細(xì)胞浸潤，第12天、第18天肺泡瘀血加重，伴明顯肺氣腫現(xiàn)象，肺泡隔處明顯增厚伴炎性細(xì)胞浸潤，涼燥組肺泡纖維素沉積現(xiàn)象較其他組嚴(yán)重。3.2外燥對小鼠肺組織水通道蛋白1(AQP1)表

6、達(dá)的影響見表1。3.3外燥對鼠肺組織水通道蛋白1(AQP1)表達(dá)“平均灰度值”的影響見表2。4討論三維晶體學(xué)方法證實(shí)，哺乳動物AQP1通道管上His182、Arg197、Phe58和Cys1914個(gè)氨基酸殘基構(gòu)成的狹口恰好是一個(gè)水分子的大小，1個(gè)AQP1分子每秒鐘允許30億個(gè)水分子通過。成人每側(cè)肺內(nèi)約有3~4億個(gè)肺泡，肺泡Ⅰ型細(xì)胞覆蓋93%的肺泡表面，肺泡Ⅱ型細(xì)胞功能之一是合成與分泌表面活性物質(zhì)，參與保持肺間質(zhì)水分恒定和肺泡處于相對濕潤狀態(tài)。Song等采用免疫組化染色技術(shù)發(fā)現(xiàn)，AQP1可表達(dá)于肺泡Ⅱ型上皮細(xì)

7、胞頂膜面，免疫電鏡顯示肺泡Ⅰ型細(xì)胞的腔膜面及基側(cè)膜面、肺泡Ⅱ型細(xì)胞微絨毛表面呈高電子密度陽性反應(yīng)。實(shí)驗(yàn)證實(shí)AQP1基因剔除小鼠肺泡毛細(xì)血管間水滲透性較野生型小鼠低10倍;小鼠肺部病毒感染后明顯肺水腫時(shí)，肺泡AQP1表達(dá)明顯減少，肺水腫減輕則有所恢復(fù)，提示AQP1減少可能是水腫液肺間質(zhì)聚集的主要原因5。本結(jié)果顯示，AQP1蛋白陽性表達(dá)多在肺泡上皮和肺泡膜緣，與文獻(xiàn)報(bào)道相符。常溫常濕組第6天、第12天與第18天肺組織AQP1表達(dá)陽性率相對恒定，常溫燥組第12天、第18天下降(P0.01)，涼燥組也呈同樣趨勢。溫

8、燥組第6天AQP1表達(dá)變化不明顯，但第12天、第18天則持續(xù)下降，提示第6天AQP1為代償性增加以維持肺局部之水液轉(zhuǎn)運(yùn)功能;但隨病程延長其代償功能隨之減弱，并與同期該組肺組織之明顯病理改變相關(guān)。表1外燥對小鼠肺組織水通道蛋白1表達(dá)的影響表2外燥對小鼠肺組織AQP1表達(dá)“平均灰度值”的影響數(shù)字圖像的灰度值是某一點(diǎn)的亮度或色彩在給定亮度或色彩序列中次序的數(shù)值，觀測“平均灰度值與”異形指數(shù)“以輔助了解AQP1在肺組織的