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《srap-rapd實(shí)驗(yàn)操作流程》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線(xiàn)閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫(kù)。
1、SRAP-RAPD1酶類(lèi)及試劑TaqDNA聚合酶為大連寶生物工程公司產(chǎn)品；蛋白酶K為Merk公司產(chǎn)品；T4DNA連接酶為Promega公司產(chǎn)品。WizardDNAClean-upSystem、Wizard1MPCRPrepsDNAPurificationSystem為Promega公司產(chǎn)品；小量基因組DNA抽提試劑盒、UNIQ-10柱式PCR產(chǎn)物純化試劑盒為上海生物工程公司產(chǎn)品。DL-2000DNASizemarker為大連寶生物工程公司產(chǎn)品，lOObpDNASizemarker由廣州普博饋贈(zèng)。
2、2培養(yǎng)基LB液體培養(yǎng)基：胰蛋0胨10g，酵母提取物5g，氯化鈉10g，加800mL去離子水充分溶解，用lmol/L的氫氧化鈉溶液調(diào)整pH為7.2?7.4,加去離子水定容至lOOOmL，分裝后15磅高壓蒸汽火菌15?20min,4°C保存?zhèn)溆?。LB固體培養(yǎng)基：于LB液體培養(yǎng)基中加1.6%的瓊脂粉，15磅高壓蒸汽滅菌15?20min,待其冷卻至70°C左右時(shí)倒板，凝固后4°C保存?zhèn)溆谩B選擇培養(yǎng)基：在LB液體培養(yǎng)基中加1.6%的瓊脂粉，15磅高壓蒸汽滅菌15?20min，待其冷卻至5（TC左右時(shí)，
3、加入氨芐青霉素（Amp）（終濃度1000IU/mL）輕輕搖動(dòng)使其混合均勻，迅速分裝至無(wú)菌平皿，室溫凝固后4°C保存?zhèn)溆谩?緩沖液及其它溶液按分子克隆實(shí)驗(yàn)指南（第三版）（薩姆布魯克等，2002）介紹的方法進(jìn)行。（1）Tris-Cl（pH8.0）Tris堿121.lg濃鹽酸42mL加去離子水定容至1000mL(2)TE緩沖液(pH8.0)lOmol/LTris-Cl(pH8.O)0.5MEDTA(pH8.O)加無(wú)菌去離子水定容至100ml,混勻(3)5xTBE緩沖液Tris硼酸EDTA加去離子水定容
4、至1000mL(4)lOxTBE緩沖液Tris硼酸EDTA(0.25mol/L)加去離子水定容至500mL(5)X-gal液(20mg/mL)X-gal二甲基甲酰胺lgL0.2(iL分裝后經(jīng)高壓滅菌，4°C保存。54g27.5g3.72g54g27.5g80)iL0.08g4mL充分溶解混勻，分裝于1.5mL滅菌消毒的Eppendorf管中，用錫箔紙裹以避光，-20°C保存。(6)IPTG液IPTG0.6g去離子水3mL充分溶解混勻，用0.25(im孔徑的細(xì)菌濾器過(guò)濾，分裝于1.5mL滅菌消毒的
5、Eppendorf管中，-20°C保存。(7)SDS裂解液500mMNaCl70gL100mMTris-Cl(pH8.0)30gL50mMEDTA(pH8.0)150^iL10%SDS30pL(6)70%乙醇無(wú)水乙醇火菌雙蒸水(9)封底用1%瓊脂糖瓊脂糖去離子水(10)40%丙烯酰胺液丙烯酰胺Bis去離子水裝于棕色瓶中，4"C保存。(11)10%AMP過(guò)硫酸銨去離子水(12)0.1%銀染液硝酸銀去離子水裝于棕色瓶中，室溫保存。(13)顯影液NaOH硼酸甲醛加去離子水定容至1000ml(14)Ca
6、Cl2溶液(0.1mol/L)無(wú)水CaCl2滅菌三蒸水充分溶解混勻，定容至250mL,其它試劑30ml70mllg100ml38g2g100mllg10ml0.5g500ml15g0.190g4ml2.77g200mL分裝后高壓滅菌。Tris堿、EDTA、IPTG、X-gal及SDS為Promega公司產(chǎn)品;胰化蛋白胨，酵母提取物，瓊脂粉均為OXOID公司產(chǎn)品；瓊脂糖為上海Yito有限公司產(chǎn)品；溴化乙錠(E.B)、氨芐青霉素(Amp)、TEMED為Sigma公司產(chǎn)品；1OXPCRbuffer、M
7、gCh(25mM)、dNTPs(2.5mMofeach)、2xRapidLigationBuffer、lOxLoadingBuffer、lOxBuffer(H)為大連寶生物工程公司產(chǎn)品；T4kinasebuffer為Promega公司產(chǎn)品；其他化學(xué)試劑如NaOH、NaCkBis,硝酸銀、丙烯酰胺、硼酸、過(guò)硫酸胺、尿素、甲醛等均為國(guó)產(chǎn)分析純級(jí)產(chǎn)品。4儀器設(shè)備HH-W600數(shù)顯三用恒溫水箱：廣州市深華生物技術(shù)有限公司產(chǎn)品；電熱恒溫隔水式培養(yǎng)箱：黃石市恒豐醫(yī)療器械有限公司產(chǎn)品；QL-901旋渦混合器：
8、江蘇海門(mén)市麒麟醫(yī)用儀器廠(chǎng)產(chǎn)品；TGL-16B臺(tái)式離心機(jī)：上海安亭科學(xué)儀器廠(chǎng)產(chǎn)品；電子天平(JJ3OO,300g/10mg)：廣州市深華生物技術(shù)有限公司產(chǎn)品；立式蒸汽滅菌器LS-C35L型：江陰濱江醫(yī)療設(shè)備廠(chǎng)；真空干膠儀：美國(guó)Bio-Rad公司產(chǎn)品；全封閉紫外透射儀(WFH-201-B):廣州深華生物技術(shù)有限公司產(chǎn)品；超凈工作臺(tái)(SW-CJ-IFD)：蘇凈集閉安泰空氣技術(shù)有限公司產(chǎn)品；凝膠圖象分析系統(tǒng)：英國(guó)UVITEC公司產(chǎn)品；恒壓恒流DF-Dn型電泳儀：北京東方特力科貿(mào)中心產(chǎn)品；BIO-RAD電
