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1、第三節(jié)植物離體培養(yǎng)體系的建立一、植物組織培養(yǎng)的階段劃分：通常將組織培養(yǎng)過程劃分為四個(gè)階段1、起始培養(yǎng)階段（誘導(dǎo)階段）2、增殖培養(yǎng)階段3、生根培養(yǎng)階段4、馴化移栽Stage0–Selection&preparationofthemotherplantsterilizationoftheplanttissuetakesplaceStageI-InitiationofcultureexplantplacedintogrowthmediaStageII-Multiplicationexplanttransferredtosho
2、otmedia;shootscanbeconstantlydividedStageIII-RootingexplanttransferredtorootmediaStageIV-Transfertosoilexplantreturnedtosoil;hardenedoffStepsofMicropropagation二、外植體起始培養(yǎng)（無菌體系建立）起始培養(yǎng)階段是指無菌體系的誘導(dǎo)和建立過程。主要受外植體、培養(yǎng)基、環(huán)境條件等因素的影響。（一）外植體的起始培養(yǎng)過程1、起始培養(yǎng)的一般過程：A、選取適宜的基因型（品種）；B、選
3、取適宜的外植體；常用外植體有莖尖、莖段、節(jié)間、葉片、葉柄等。C、流水沖洗外植體；D、外植體切割、分離及滅菌處理；E、外植體接種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基。F、環(huán)境條件控制促進(jìn)外植體的生長。2、接種外植體的生長過程：A細(xì)胞分裂的啟動；B細(xì)胞增殖；C組織和器官的形成。（二）影響外植體起始培養(yǎng)的因素：1、影響外植體起始的因素A外植體的遺傳基礎(chǔ)及生理影響B(tài)培養(yǎng)基組成成分：礦物鹽類、微量有機(jī)成分、生長調(diào)節(jié)物質(zhì)、碳源、瓊脂、活性炭、酚類化合物、多胺等。C培養(yǎng)條件：光照、溫度、濕度A外植體(1)外植體種類及基因型(2)外植體供體植株和外植體的來源
4、與生理狀態(tài)(3)外植體大小(4)外植體的極性外植體種類及基因型單子葉植物不易誘導(dǎo)器官發(fā)生。b.木本植物較難誘導(dǎo)。c.存在基因型差異（如番茄29%~63%）d.開始生長季節(jié)取材容易誘導(dǎo)。外植體狀態(tài)：外植體大小：外植體越小成苗能力越弱，較大的外植體增殖較快。外植體極性：當(dāng)外植體以形態(tài)學(xué)的基部接種于培養(yǎng)基上時(shí)，從遠(yuǎn)離基部的表面誘導(dǎo)出芽、苗數(shù)目較多。B、培養(yǎng)基a培養(yǎng)基類型:b碳源的影響:C、植物生長調(diào)節(jié)物質(zhì)a細(xì)胞分裂素和生長素類b赤霉素類c乙烯及其生物合成抑制劑d其他有機(jī)化合物細(xì)胞分裂素和生長素：a.部分植物單獨(dú)使用細(xì)胞分裂素
5、（CTK）可以形成無根苗b.部分植物無根苗的形成需要細(xì)胞分裂素和生長素配合使用。c.外源CTK與生長素必須維持適當(dāng)比例以改變內(nèi)源激素平衡，促進(jìn)器官發(fā)生。d.不同細(xì)胞分裂素對分化的作用效果不同e.苯基脲衍生物具有較高的細(xì)胞分裂素活性（4PU、CPPU、TDZ）赤霉素類：赤霉素與促進(jìn)細(xì)胞伸長和開花反應(yīng)，組織培養(yǎng)條件下只在少數(shù)植物上對芽的誘導(dǎo)有促進(jìn)作用。如馬鈴薯、甜菜、櫻桃等。乙烯及其生物合成抑制劑：具有促進(jìn)和抑制兩方面的影響，但抑制作用多于促進(jìn)作用。因此在某些植物種類，乙烯抑制劑可以促進(jìn)芽的形成。AgNO3、CoCl、AV
6、G其他有機(jī)化合物：腺嘌呤衍生物具有促進(jìn)器官分化作用。椰子汁等物質(zhì)也具有促進(jìn)分化的功能。3.培養(yǎng)條件及其他因素（1）光照通常1000~5000Lx16小時(shí)光照。非洲菊1000lx，洋蔥16小時(shí)，馬鈴薯連續(xù)光照，葡萄要求短日照。光質(zhì)也影響芽的再生，藍(lán)光有利于器官發(fā)生，煙草實(shí)驗(yàn)，而紅光有利于根的發(fā)生。（2）溫度大部分植物要求25oC，少數(shù)要求較低溫度（15~20oC）或較高的溫度（30oC）如菖蒲、水仙、洋蔥、龜背竹等。變溫處理對有些植物器官發(fā)生有促進(jìn)作用，如豌豆。（3）濕度：培養(yǎng)室相對濕度以70％－80％為適宜，培養(yǎng)容器內(nèi)
7、要保持適宜濕度，防止過于干燥或濕度過大。（4）氣體：要注意保持培養(yǎng)容器內(nèi)良好的通氣性。維持適宜的氧氣和二氧化碳濃度，防止有害氣體的積累。如何進(jìn)行外植體的起始培養(yǎng)（無菌體系的建立）？1、選擇適宜的外植體；2、選擇適宜的培養(yǎng)基；3、創(chuàng)造適宜的環(huán)境條件20050926
