小鼠黏著斑激酶（FAK）試劑盒（ELISA）.doc

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1、小鼠黏著斑激酶（FAK）試劑盒（ELISA）使用說明書l本試劑盒用于體外定量檢測血清、血漿、組織、細胞上清及相關(guān)液體樣本中小鼠黏著斑激酶（FAK）的含量。l有效期：6個月l保存條件：2-8℃l本試劑盒僅供體外研究使用，不用于臨床診斷實驗原理試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）。往預(yù)先包被小鼠黏著斑激酶（FAK）捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標(biāo)本、標(biāo)準品、HRP標(biāo)記的檢測抗體，經(jīng)過溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。

2、顏色的深淺和樣品中的小鼠黏著斑激酶（FAK）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），計算樣品濃度。樣本處理及要求1.血清：全血標(biāo)本請于室溫放置2小時或4℃過夜后于1000g離心20分鐘，取上清即可檢測，或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。2.血漿：可用EDTA或肝素作為抗凝劑，標(biāo)本采集后30分鐘內(nèi)于2-8°C1000g離心20分鐘，或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。3.組織勻漿：用預(yù)冷的PBS(0.01M,pH=7.4)沖洗組織，去除殘留血液（勻

3、漿中裂解的紅細胞會影響測量結(jié)果），稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對應(yīng)體積的PBS（一般按1:9的重量體積比，比如1g的組織樣品對應(yīng)9mL的PBS，具體體積可根據(jù)實驗需要適當(dāng)調(diào)整，并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑）加入玻璃勻漿器中，于冰上充分研磨。為了進一步裂解組織細胞，可以對勻漿液進行超聲破碎，或反復(fù)凍融。最后將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘，取上清檢測。4.細胞培養(yǎng)物上清或其它生物標(biāo)本：1000g離心20分鐘，取上清即可檢測，或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。注

4、：標(biāo)本溶血會影響最后檢測結(jié)果，因此溶血標(biāo)本不宜進行此項檢測。標(biāo)本處理1.本公司只對試劑盒本身負責(zé)，不對因使用該試劑盒所造成的樣本消耗負責(zé)，請使用者使用前充分考慮到樣本的可能使用量，預(yù)留充足的樣本。2.實驗前應(yīng)預(yù)測標(biāo)本含量，如果標(biāo)本濃度過高，應(yīng)對標(biāo)本進行稀釋，使稀釋后的標(biāo)本符合試劑盒的檢測范圍，計算時再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。標(biāo)本使用0.01mol/L的PBS稀釋(PH=7.0-7.2)。3.若所檢樣本不包含在說明書所列樣本之中，建議進行預(yù)實驗驗證其有效性，并注意留存樣本。4.使用化學(xué)裂解液制備的組織勻漿或

5、細胞提取液可能會由于某些化學(xué)物質(zhì)的引入導(dǎo)致ELISA實驗結(jié)果偏差。5.若樣本為細胞培養(yǎng)上清，因該類樣本干擾因素較多，如：細胞狀態(tài)、細胞數(shù)量、采樣時間等，所以可能存在檢測不出的情況。6.某些天然蛋白或重組蛋白，包括原核及真核重組蛋白，可能因為與本產(chǎn)品所使用的檢測抗體及捕獲抗體不匹配，而不被檢測出。7.建議使用新鮮樣本，保存時間過長可能會存在蛋白降解或變性導(dǎo)致實驗結(jié)果偏差。需要而未提供的試劑和器材1.酶標(biāo)儀（450nm）2.高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-10

6、00uL3.37℃恒溫箱4.蒸餾水或去離子水試劑盒組成名稱96孔配置48孔配置備注微孔酶標(biāo)板8孔×12條8孔×6條無標(biāo)準品0.3mL*6管0.3mL*6管無樣本稀釋液6mL3mL無檢測抗體-HRP10mL5mL無20×洗滌緩沖液25mL15mL按說明書進行稀釋底物A6mL3mL無底物B6mL3mL無終止液6mL3mL無封板膜2張2張無說明書1份1份無自封袋1個1個無備注：1.標(biāo)準品濃度依次為：8、4、2、1、0.5、0ng/mL2.經(jīng)過大量正常標(biāo)本檢驗，標(biāo)本的正常濃度值均在試劑盒提供的檢測范圍內(nèi)，實驗

7、過程中直接取50μL樣本上樣即可。當(dāng)有部分樣本值超過最大標(biāo)準品濃度時，可用樣本稀釋液將標(biāo)本進行適當(dāng)稀釋后再進行實驗。注意事項1.嚴格按照規(guī)定的時間和溫度進行溫育以保證準確結(jié)果。所有試劑都必須在使用前達到室溫20-25℃。使用后立即冷藏保存試劑。1.洗板不正確可以導(dǎo)致不準確的結(jié)果。在加入底物前確保盡量吸干孔內(nèi)液體。溫育過程中不要讓微孔干燥掉。2.消除板底殘留的液體和手指印，否則影響OD值。3.底物顯色液應(yīng)呈無色或很淺的顏色，已經(jīng)變藍的底物液不能使用。4.避免試劑和標(biāo)本的交叉污染以免造成錯誤結(jié)果。5.在儲

8、存和溫育時避免強光直接照射。6.平衡至室溫后再打開密封袋以防水滴凝聚在冷板條上。7.任何反應(yīng)試劑不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發(fā)的強烈氣體。任何漂白成分都會破壞試劑盒中反應(yīng)試劑的生物活性。8.不能使用過期產(chǎn)品。9.如果可能傳播疾病，所有的樣品都應(yīng)管理好，按照規(guī)定的程序處理樣品和檢測裝置。試劑準備試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡后方可使用。20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋，即1份20×洗滌緩沖液加19份蒸餾水。操作步驟1.從室溫平衡20min