資源描述：
《酶聯(lián)免疫檢測技術的應用》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內(nèi)容在學術論文-天天文庫。
1、酶聯(lián)免疫檢測技術的應用真菌毒素的檢測：黃曲霉毒素B1、M1以及T?2毒素，脫氧雪腐鐮刀菌烯醇(嘔吐毒素DON),二乙酰草鐮刀菌烯醇(DAS),玉米赤霉烯酮，赫曲霉毒素A(OA)o農(nóng)藥的檢測：主要有除草劑與殺蟲劑兩大類，例如殺暝松(FN)、甲氟磷酸異已酶(SOMAN)、草不綠(Alachor)、西維因(Carbaryl)、多菌靈及克菌丹(Captan)等。其他類的檢測：鹽酸克倫特羅，河豚毒素，植物毒素如罄粟殮、嗎啡、藻類毒素，苯并(a)蹤，抗生素，激素類以及一些營養(yǎng)物質(zhì)和食品添加劑如隸蛋白(Gliaclin),醬油蛋白(Soyprotein),花生蛋白(Peanutprotein),牛乳
2、清蛋白(BorineWheyProtein)等。隨著食品工業(yè)的發(fā)展，對分析檢測的要求越來越高，從而也使ELISA方法將更趨完善。一方而為提高ELISA方法的靈敏度和特異性，制備單克隆抗體的技術的發(fā)展，將和ELISA法互相結合，從而使食品衛(wèi)生分析達到DNA分子結構水平，促使食品工業(yè)的健康發(fā)展。1放射免疫分析(RIA)放射免疫法(Radioimmunoassay,RIA)優(yōu)點是特異性強、靈敬度高、精確、簡便易行。它包括以標記抗原(Antigen,Ag)為特點的放射免疫分析(Radioimmunoassay,RIA)和以標記抗體(Antibody,Ab)為特點的免疫放射分析(Immunora
3、diometricassay,IRMA)o前者以液相競爭結合法居多，既測大分子抗原又測小分子抗原；后者以固相法測大分子抗原為主。最早建立的農(nóng)藥免疫法中，RIA占了很大比重，建立了狄氏劑、艾氏劑、2,4?D和2,4,5?T、對硫磷和百草枯等農(nóng)藥的放射免疫法。但由于進行RIA需使用昂貴的計數(shù)器，存在放射性防護和廢物處理等問題，其應用受到較大限制。1982年后發(fā)表的農(nóng)藥免疫分析文章，主要是酶免疫分析法。2酶免疫法(EIA)酶免疫法(EnzymeImmunoassay,EIA)是將抗原、抗體的特異性免疫反應和酶的高效催化作用有機結合起來的一種免疫分析方法。酶免疫法的檢測原理與放射免疫法類似，通
4、過測定結合于固相的酶的活力來測定被測定物的量。用作標記物的酶有辣根過氧化物酶(HorseradishPeroxidase,HRP)和堿性磷酸酶(AlkalinePhosphatase)o酶標試劑制備容易、穩(wěn)定、價廉。酶免疫分析的靈敏度接近放射免疫技術，而可借助于簡單的儀器作定量測定，是FI前農(nóng)藥監(jiān)測屮應用最廣泛的免疫分析技術。EIA法包括酶聯(lián)免疫吸附分析法(Enzyme-LinkedImmunosorbentAssay,ELISA)、酶免疫試驗法(Enzyme-monitoredImmunotest,EMIT)、競爭結合酶免疫分析法(CompetitiveBindingEnzymeIm
5、munosorbentAssay,EIA)和免疫酶分析法(ImmunoenzymometricAssay,IEMA)。其中基于競爭吸附的ELISA已成為農(nóng)藥監(jiān)測中的首選方法。3熒光免疫分析(FIA)本世紀40年代，Coons采用熒光素標記抗體檢測可溶性肺炎球菌多糖抗原,首次創(chuàng)建了熒光抗體檢測技術。熒光免疫法具有專一性強、靈敏度高、標記物不易失活、價格低廉、無放射性污染等優(yōu)點。至今，F(xiàn)IA已廣泛應用于微量、超微量物質(zhì)分析測定。FIA常用的熒光素有異硫氟酸酯(Fluoresceineisothiocyanate,FITC)和羅丹明(BLissamineRhodamineB200RB200)
6、等。將熒光免疫與光纖傳感器結合形成的熒光免疫傳感器是近年來熒光免疫法研究十分活躍的領域。熒光免疫傳感器是將抗體(抗原)固定在適當基底上，實現(xiàn)生化熒光信號向光電信號的轉(zhuǎn)變，以對待測物質(zhì)進行定量檢測。測定環(huán)境中農(nóng)藥殘留的分子識別元件可以是AchE［10］抗體［11］和堿性磷酸酶等。Rogers等［12］將FITC標記的AchE固定在石英纖維上以檢測酶的活性。乙酰膽堿水解時產(chǎn)生的H+猝滅纖維表面的熒光信號，熒光強度減弱。有機磷農(nóng)藥抑制AchE的活性，從而降低熒光猝滅能力，可檢測溶液中10-8mol.L?1的AChE抑制劑，其響應時間小于lmin。Anis等將有機農(nóng)藥對硫磷抗體和FITC標記的
7、Anti-IgGAb蛋口固定在石英纖維上制得熒光免疫傳感器。測定對硫磷的檢測限為10-9mol.L-loSchulman利用競爭性熒光能量轉(zhuǎn)移法原理，用FITC標記的多克隆氯乙異丙嗪(atrazine)抗體，用四甲基羅丹明標記農(nóng)藥氯乙異丙嗪，研制出光纖免疫傳感器，通過增加能量轉(zhuǎn)移的量改善了靈皺度。Nonhnip［13］利用光纖免疫傳感器檢測農(nóng)藥中擬除蟲菊酯(pyrethroide)oBier等［14］以熒光和損耗波作用為基礎，研究了光纖傳感器對
