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1、鹽脅迫時長對小麥葉片蛋白總量影響的研究[摘要]為了探究小麥的抗鹽機理,實驗利用尿素硫腺法提取小麥葉片蛋白質,然后用考馬斯亮藍法分別測定對照和Na2C()3/NalIC03鹽脅迫12h、24h、36h、48h的蛋白質含量,并分析其變化情況。結果表明在12h鹽處理后鹽脅迫相關蛋白含量上升,超過12h后蛋白質總量下降。另外,利用SDS-PAGE技術對提取的蛋白質進行分離分析,結果表明跟對照組相比鹽脅迫后蛋白質,有一些多余的條帶,可能是一些跟鹽脅迫有關的小肽類,酶類。[關鍵詞]鹽脅迫時長蛋白質電泳考馬斯亮藍法中圖分類號:G633.6文獻標識碼:A文章編號
2、:1009-914X(2016)28-0390-01一、刖§(-)鹽脅迫對小麥的影響小麥屬于甜土植物,鹽脅迫對小麥牛長發(fā)育有很重要的影響,在長時間高濃度的鹽脅迫情況下會導致小麥死亡。鹽處理下,根部感受脅迫信號,產生生理反應,多方面影響地上部生長。(二)小麥對鹽脅迫的應答1?滲透調節(jié)滲透調節(jié)可分為離子滲透調節(jié)和可溶性有機物有機物滲透調節(jié)兩方面。鹽處理下,小麥對人量元素的吸收受到一定程度的限制,因而影響植物的正常牛長發(fā)育。2.大分子蛋白在鹽脅迫中的作用在鹽脅迫情況下,活性氧的產生與消除平衡被破壞,細胞中活性氧的增加會對胞內蛋口質和核酸等大分子物質造成
3、破壞,對膜系統(tǒng)也造成一定程度的破壞。因此,植物的氧化防御系統(tǒng)便被激活,產生SOD等物質消除氧自由基,從而減少自由基對植物的傷害。(三)測定蛋白質含量的方法蛋白質濃度的測定有關方法有福林酚試劑法、雙縮腺法>Bradford法、凱氏定氮法、紫外吸收法等,其中應用較為廣泛的是Bradford法。(四)蛋白質組學研究和進展Tiselius在1937年發(fā)明的電泳技術,為蛋白質分離提供新思路。在1956年,Smithies發(fā)明了凝膠電泳技術,首先用淀粉凝膠分離蛋白質。在此Z后,蛋白質分離技術即凝膠電泳技術得到了迅速的發(fā)展,其屮不連續(xù)緩沖體系等一些新技術的發(fā)明
4、也為蛋白質組學研究和進展起了重要作用。不連續(xù)的凝膠電泳技術,涉及很多緩沖液和很多凝膠系統(tǒng)。給電極施加電壓后,緩沖離子從上面的凝膠至下面的凝膠。(五)本研究的目的和意義1.理論意義植物的主要器官包括根、莖、葉,葉進行光合作用,合成能源物質,為植物提供營養(yǎng)。在土壤鹽脅迫條件下,植物會失去一定量的水分,葉片結構會遭到一定程度的破壞,光合速率會下降,從而影響植物牛長發(fā)育。小麥葉片蛋白質組學的分析等可為植物葉片響應鹽脅迫機制提供重要的新的線索。1.實踐意義小麥是世界上主要的糧食作物之一。目前,世界上某些地區(qū)存在著土壤鹽堿化問題,是人類面臨的生態(tài)危機之一,給
5、農業(yè)生產小麥造成一定程度的影響。世界現(xiàn)有耕地中蘇打鹽堿土壤占耕地總面積的60%o所以研究清楚鹽脅迫機制對小麥牛長發(fā)育的影響,對研究抗鹽脅迫小麥有很好的指導作用。另外,研究植物對鹽堿脅迫的響應機制,為提高鹽堿地種植小麥的數(shù)量和質量提供一定的依據,而且可以幫助修復鹽堿土地。二、Na2CO3和NaIIC()3脅迫后小麥葉片蛋口的研究(―)實驗方法晉麥(MG115山西省農業(yè)科學研究院小麥研究所);(二)實驗方法培養(yǎng)小麥一一鹽處理一一提取小麥葉片屮的蛋白質一一裂解階段CoomassiebilliantblueG-250法測小麥蛋白含量三、結果與分析(-)鹽
6、脅迫不同時長和對照組蛋白含量比較Coomassiebilliantblue法測出鹽脅迫不同時長的葉片蛋白質溶液的濃度,進而求岀0.8g小麥葉片中蛋白質的總量。四、討論對鹽脅迫下小麥葉片蛋白質隨時長的變化的研究,為小麥的抗鹽機制研究提供相關依據。提収出0?8g小麥葉片的蛋白質,通過已知的體積和蛋白質溶液濃度,計算蛋白質總量。根據圖2可知,在鹽處理12h后,蛋白質總量有所升高,可能是由于小麥為了抵抗鹽脅迫會產牛一些鹽脅迫蛋白,例如,保護性酶蛋白、酸性蛋白質、水通道蛋白、鈣調蛋白等。在鹽處理24h后,小??蛋白質總量有所下降,36h后,48h后依次下降
7、。可能是由于小麥已經遭到破壞,適應能力下降。如圖1聚丙烯酰胺電泳條帶分析,結果顯示有一個主條帶分子量為66.2KD。除此Z外還有一些較弱的條帶。和對照相比有一些多余的條帶,可能是一些與鹽脅迫相關的小肽或酶類??傮w條帶不是特別理想,分析原因有以下兩方面:一方面可能是由于蛋白質保存時間過長保存條件限制,有蛋白質變性等情況的發(fā)生。另一方面,可能是由于操作不當,電極緩沖液中有氣泡所導致。參考文獻[1]馬洪波,曹月陽,陳杰,汪吉東,張永春,常志州.土壤鹽脅迫對小麥養(yǎng)分和滲透調節(jié)物質的影響[J]?江蘇農業(yè)學報,2012,06:1300-1305.[2]高巍,
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