腫瘤基因治療基本方法

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1、腫瘤基因治療基本方法基因是一段染色體DNA序列，用于產(chǎn)生功能產(chǎn)物多肽或功能RNA分子?；蛑委熞话闶侵笇⑾薅ǖ倪z傳物質(zhì)轉(zhuǎn)入病人特定的靶細胞，以達到預(yù)防或治療疾閏的目的方法。腫瘤基因治療是用正常或野生型某因矯正或貫換致病基因或引入有治療價植的其它來源基因的一種治療方法?；蛑委熞话闶且胄揎椈蛴诓∪梭wA而并非該基因的產(chǎn)物，即是一種療法而非新產(chǎn)品。但是，通過體內(nèi)直接途徑可將外湖DNA象傳統(tǒng)的藥物一樣注射到機體內(nèi)，幫、故有人稱這些外源的DNA的基因藥物。基因治療中，從分子生物學(xué)角度可分為兩種方式：一

2、是基因矯正和轉(zhuǎn)換，即將基因的異常序列進行矯正和置挽，即將蕋因的異常序列進行矯正和精確的原位修復(fù)；二是基因添加和增補，即不去除異?；?，而是通過具有治療意義的外源基因的定點整合，使其表達正常產(chǎn)物以補償缺陷基因的功能。根據(jù)針對宿主病變細胞基因采取的措施不同，可分為基因置換、基因修正、基因轉(zhuǎn)移和基因火活叫種力*法。腫瘤基因治療研究中，通常采用基因轉(zhuǎn)移和基因火活方法?；蜣D(zhuǎn)移是指將外源性H的基因?qū)氩∽兗毎蚱渌毎琀的基因的表達產(chǎn)物修飾缺陷細胞，使其恢復(fù)功能或使原有的功能得到加強，故又稱為基因修飾。

3、腫瘤基因修飾治療研究包括免疫基因治療、增強抑癌基因表達、靶向化療或提高機體化療耐受性等內(nèi)容?；驕缁钍菓?yīng)用反義技術(shù)特異性封閉某些基因的表達。反義技術(shù)是指利用針對特異性DNA和RNA片段按堿基配對的原則人工合成小分子核苷酸序列（反義寡苷酸），與其目的DNA和RNA序列互補結(jié)合，以選擇性抑制FI的基因翻譯或轉(zhuǎn)靈過程的技術(shù)和方法。在腫瘤基因滅活治療中，訂要是利用反義寡核苷酸抑制或封閉某些癌基因的表達?；蜣D(zhuǎn)移療法一般分為兩類：一是體細胞系基因轉(zhuǎn)移，主要用于防治遺傳性及非遺傳性疾??；二是胚胎基因轉(zhuǎn)移，用

4、于預(yù)防遺傳性疾病。臨床上，基因治療是指體細胞基因治療?；蛑委熁旧戏至θ剑孩倩?qū)耄菏侵赴鸦蚧蚝谢虻妮d體導(dǎo)入機體：②基因傳遞：是指基因從導(dǎo)入部位進入靶細胞核；③基因表達：是指細胞中治療性基因產(chǎn)物的形成。1990年，Rosenberg等首次在晚期癌癥病人屮利用逆轉(zhuǎn)錄病毒載體基因轉(zhuǎn)移技術(shù)，將轉(zhuǎn)導(dǎo)了編碼腫瘤壞死因子的腫瘤浸潤淋巴細胞用于治療晚期癌癥。近10年來，隨著人們對腫瘤免疫、腫瘤病因及分子機制等研宄的深入，腫瘤基因治療獲得了突飛猛進的發(fā)展，并逐漸走向成熟，批準(zhǔn)進入臨床試驗的基因藥物逐

5、年增多。0前開展的免疫基因治療、轉(zhuǎn)導(dǎo)抑癌基因、反義癌基因以及靶向化療等腫瘤基因治療研宂，其結(jié)果令人鼓舞。腫瘤基因治療已成為R前攻克和治愈腫瘤最具希望的，也是最活躍的領(lǐng)域。1、腫瘤基因治療的基本方法1.1確定基因治療載體運載或攜帶治療性遺傳物質(zhì)的工具稱之為載體（Vector）。天然存在的載體可通過三種不同的機制在不同細胞之間轉(zhuǎn)移：結(jié)合（和運動），轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)染。轉(zhuǎn)導(dǎo)依賴于整合入細胞基因組并經(jīng)細胞分裂繁殖的病毒DNA分子。轉(zhuǎn)染是DNA通過物理或化學(xué)的方法被動轉(zhuǎn)運至細胞的過程。轉(zhuǎn)導(dǎo)用載體通常是病毒，也是非

6、病毒載體?；蛑委熭d體應(yīng)具備以下條件：①易于進入細胞；②在特異細胞或組織達到有規(guī)律的、充分的及持續(xù)的外源基因表達；③外源基因應(yīng)含有或整合于基因組活化區(qū)內(nèi)或能自主復(fù)制的構(gòu)件。④整個過程應(yīng)安全有效并具有選擇性；⑤易于大14:生產(chǎn)。目前采用的載體還沒有一種能具備上述所有的條件。理想的基因治療載體除具備以上條件外，應(yīng)該是靜脈內(nèi)傳遞并只轉(zhuǎn)染特異細胞。0前常用基因治療載體可分為病毒載體和非病毒載體兩類。1.1.1病毒載體1.1.1.1逆轉(zhuǎn)錄病毒（RV）載體RV載體是經(jīng)修飾的逆轉(zhuǎn)錄病毒，其復(fù)制所需要的基因被除

7、去，代之以治療性基因和選擇性標(biāo)記物。RV優(yōu)點是能在體外條件下把基因高效轉(zhuǎn)入增殖細胞，可同時感染大呈細胞，有廣泛的宿主范圍，能穩(wěn)定整合，插入基因的表達時間長等；缺點是RV的負載容量限于8kb,整合的隨機性有潛在的危險性，基因?qū)朐祟惣毎男实图鞍屑毎€(wěn)定轉(zhuǎn)化后就難以逆轉(zhuǎn)治療等。在腫瘤基因治療研宂中，逆轉(zhuǎn)錄病毒載體介導(dǎo)法是應(yīng)用最為廣泛、有效的基因轉(zhuǎn)移方法。1.1.1.2腺病毒（AV）載體重組腺病毒載體在基因轉(zhuǎn)移中的應(yīng)用相當(dāng)廣泛。AV優(yōu)點是能感染非增殖細胞，不整合入機體細胞染色體，滴度商，免疫原

8、性強等。缺點是容:U:?。?.5kb）,體仙表達時間短，使用次數(shù)受限制等。1.1.1.3痘苗病毒（VV）載體VV載體的優(yōu)點是復(fù)制能力強，載體容易構(gòu)建，容量大，可容納25kv片段并且摻入基因的數(shù)fi沒有限制，免疫原性強，使用安全等。裾點是病毒的強復(fù)制能力可能對處于免疫抑制狀態(tài)的病人有害，偶爾也在健康個體致病等。1.1.1.4腺相關(guān)病毒（AAV）載體AAV是4.7kb單鏈DNA基因組的人類微小病毒。AAV載體的優(yōu)點是：①AAV并不引起任何疾病，而在細胞培養(yǎng)及動物模型可表現(xiàn)抗腫瘤作用；②病毒本身只有兩