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1、溫州醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文IL一17對大鼠肝星狀細(xì)胞膠原代謝的影響及其機(jī)制探討中文摘要目的本文研究白細(xì)胞介素17(IL-17)對大鼠肝星狀細(xì)胞(HSC—T6)增殖、COLI、TIMP一1表達(dá)的影響及細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶(ERK)信號(hào)通路在此過程中的調(diào)控作用，探討IL—17對肝星狀細(xì)胞增殖、膠原代謝的影響及其可能機(jī)制。方法1．采用不同濃度的工L一17(Ong／mL、lng／mL、lOng／mL、lOOng／mL、500ng／mL)處理體外培養(yǎng)的大鼠肝星狀細(xì)胞HSC-T6，應(yīng)用四甲基偶氮唑藍(lán)法(M訂法)檢測不同濃度的IL一17處理不同時(shí)間(24h、48h
2、、72h)后對HSC-T6細(xì)胞體外增殖的影響，采用RT—PCR和ELISA法檢測不同濃度的IL-17作用HSC—T624h后COLI和TIMP一1mRNA和蛋白的表達(dá)量。得出最佳藥物濃度和作用時(shí)間進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。2．根據(jù)以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果，我們選擇lOOng／mLIL一17作為后續(xù)實(shí)驗(yàn)。采用MTT法、RT—PCR法和ELISA法檢測HSC—T6經(jīng)ERK信號(hào)通路特異性阻滯劑PD98059(20umol／L)干預(yù)后IL一17(100ng／mL)對HSC—T6增殖、COLl和TIMP-1mRNA及蛋白表達(dá)的影響。3．采用westernblot法檢測IL一17
3、(100ng／mL)作用HSC-T6后不同時(shí)間點(diǎn)(Omin、5min、15min、30min)后p-ERKl／2、ERKl／2和GAPDH的表達(dá)情況。結(jié)果1．不同濃度的IL一17(Ong／mL、lng／mL、lOng／mL、lOOng／mL、500ng／mL)處理體外培養(yǎng)的大鼠肝星狀細(xì)胞HSC—T624h后，細(xì)胞增值OD值分別為0．304+0．028：0．307±0．027；0．321±0．013；0．324±0．012；0．326±0．079；作用48h后OD值分別為0．367±0．032；0．372±0．032；0．411±0．024；0．
4、500±0．018；0．524±0．0117；作用72h后OD值分別為0．671±0．027；0．717±0．048；0．765±0．037：0．853±0．038；0．871±0．046。顯示出濃度一時(shí)間依賴性。作用24h各濃度組與對照組比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，作用48、72h除lng／mL組與對照組比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義外，其余各組與對照組比差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0．05)。2．不同濃度的IL一17(Ong／mL、lng／mL、lOng／mL、lOOng／mL、500ng／mL)處理體外培養(yǎng)的大鼠肝星狀細(xì)胞HSC—T624h后，COLImRNA表
5、達(dá)量分別為0．381±0．055：0．406±0．057；0．469±0．05l；0．564±0．034；0．676±0．040。TIMP-1mRNA表達(dá)量分別為0．447±0．024；0．469±0．033；0．542±0．016；0．683±0．024；0．836±0．041。COLI蛋白分泌量分別為10．359±2．701；12．846±3．778：28．764±4．156；49．231±1．304；78．793±9．377。TIMP一1蛋白分泌量分別為53．0563溫州醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文±6．670：67．578±5．635；137．0
6、82±11．070；194．598±8．760：254．682±12．008。以上結(jié)果除ing／mL組與對照組比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義外，其余各組與對照組比差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0．05)。3．經(jīng)ERK信號(hào)通路特異性阻滯劑PD98059(20umol／L)干預(yù)后，IL-17促HSC-T6增殖、COLI和TIMP—ImRNA和蛋白表達(dá)的作用受到明顯的抑制，與IL-17組比差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0．05)。4．IL一17(100ng／mL)刺激體外培養(yǎng)的HSC-T6后，能明顯激活ERK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，并呈現(xiàn)時(shí)間依賴性，刺激5min后即可見p-ERKI／
7、2活性增強(qiáng)，作用15min后p-ERKI／2活性繼續(xù)增強(qiáng)并達(dá)到最高峰，隨后呈下降趨勢，但作用30min后仍有較高表達(dá)。結(jié)論I．IL—17能促進(jìn)肝星狀細(xì)胞HSC—T6增殖，并呈現(xiàn)一定的濃度一時(shí)間依賴性。2．IL一17能促進(jìn)肝星狀細(xì)胞HSC—T6COLI和TIMP-ImRNA及蛋白的表達(dá)，并呈現(xiàn)一定的濃度依賴性。3．ERK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路特異性阻滯劑PD98059能抑制IL-17促肝星狀細(xì)胞HSC—T6增殖、COLI和TIMP—ImRNA及蛋白表達(dá)。4．IL一17能激活肝星狀細(xì)胞HSC—T6的ERK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，并呈一定的時(shí)效關(guān)系。關(guān)鍵詞IL一17；H
8、SC—T6：增殖；COLI；TIMP-I：ERK；PD980594溫州醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文TheEffectsofInterleukin-·17onCo
