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1、美基生物-生物樣品前處理專家020-22927158HiPureSoilDNA96Kit96孔板土壤DNA抽提試劑盒HiPureSoilDNA96Kit是專門為土壤DNA提取而設計的。試劑盒采用硅膠柱純化技術(shù)，并結(jié)合獨創(chuàng)的腐殖酸吸附劑技術(shù)，適合于從各種土壤，如森林土壤，草地土壤，礦區(qū)土壤，底泥等樣品中提取高產(chǎn)量高純度的總DNA。腐殖酸吸附劑可高效地吸附土壤樣品中的腐殖酸和其它抑制因子，純化的DNA可直接用于PCR、Southern雜交、酶切等實驗。產(chǎn)品組份產(chǎn)品編號D3144-01D3144-02純化次數(shù)96次596次HiPuregDNAPlate415Gl
2、assBeads(0.1~0.6mm)60g300g陶瓷珠100顆500顆ReagentDX(消泡劑)0.6ml3.0mlBufferSOL120ml500mlBufferSDS10ml60mlBufferPS40ml150mlAbsorberSolution40ml150mlBufferGDP160ml2400mlBufferGW250ml2100mlElutionBuffer30ml120ml說明書11保存條件本產(chǎn)品除AbsorberSolution外，可在室溫(15~25℃)保存12個月。低溫下，BufferSDSwww.magentec.com.c
3、n可能會有沉淀形成，需37℃水浴讓沉淀完全溶解。AbsorberSolution室溫運輸，收到產(chǎn)品后請保存于2~8℃。準備事項l用無水乙醇稀釋BufferGW2，并于室溫保存。l2ml厚壁離心管或螺口離心管實驗步驟1.準備2ml勻漿管：在2.0ml厚壁離心管(Eppendorf)或螺口離心管中，加入0.4~0.5gGlassBeads(0.4~0.5ml)和一顆陶瓷珠。2.珠磨裂解微生物(根據(jù)實際情況選擇)l手工珠磨:在裝好玻璃珠和陶瓷珠的離心管中，加入0.25-0.5g土壤和0.8mlBufferSOL，在渦旋儀上高速渦旋5~10分鐘裂解微生物，再加入8
4、0μlBufferSDS至樣品中，渦旋混勻20秒，按第3步進行操作。l珠磨儀:在裝好玻璃珠和陶瓷珠的螺口離心管中，加入0.25-0.5g土壤和0.8mlBufferSOL和40μlBufferSDS，在珠磨儀上進行勻漿。不同的珠磨儀因功率不一樣，應根據(jù)儀器進行調(diào)整。舉例：采用FastPrep-24?(MP)時，推薦速度為6.0，時間為30秒。按第3步進行操作。推薦用珠磨儀如FastPrep-24?來勻漿土壤樣品，珠磨儀高能量高，短時間勻漿就能達到效果可減少DNA斷裂。用渦旋儀渦旋勻漿土壤時，因效率低，時間長，對DNA完整性和產(chǎn)量方面都會有影響。若樣品中含水
5、量很多，可先離心去除水分后再進行操作。3.(可選)進一步裂解細菌：l對多數(shù)微生物：65~70oC水浴15分鐘。l對極難破裂的細菌:90oC水浴15分鐘。部分細菌或真菌帶有很厚的細胞壁，如葡萄球?qū)俚?，這些微生物極難裂解，90oC水浴10分鐘可提高其裂解效果，但90oC處理會引起DNA的片斷化。推薦先采用70oC水浴來提取DNA，再根據(jù)結(jié)果調(diào)整水浴溫度和珠磨時間。處理某些樣品時(如富含有機質(zhì)的底泥)，70oC加熱也可能會引起DNA的片段化，此時可省略這一步。DNA的片段化不會影響常規(guī)的PCR運用。4.13,000xg離心1分鐘。www.magentec.com
6、.cn1.轉(zhuǎn)移0.6ml上清至新的離心管中，加入200μlBufferPS至裂解液中，渦旋混勻10秒。2.再加入200μlAbsorberSolution至裂解液中，渦旋混勻10秒。冰上放置10分鐘，期間顛倒混勻2次。使用前充分搖勻AbsorberSolution，將移液槍頭的頭部剪去小部分避免槍頭的堵塞。BufferPS和AbsorberSolution是上清液體積的1/3倍，若上清體積不足0.6ml，按比例調(diào)整。3.13,000xg離心5分鐘。4.轉(zhuǎn)移上清液至2ml離心管中，加入等倍體積BufferGDP，顛倒混勻混合液3~5次。舉例：若上清液的體積為
7、700μl，則需加入700μlBufferGDP。自動化核酸提取上機（Qiacube）：5.分裝好混合液至96孔板中，依次分裝BufferGDP、BufferGW2（已用乙醇稀釋）、ElutionBuffer至相應的溶液槽中，運行程序。6.結(jié)束程序，取出DNA，保存在-20/-80℃。離心方案9.把HiPureDNAPlate裝在2ml收集板中。轉(zhuǎn)移混合液至96孔板中。4,000xg離心5分鐘。10.倒棄濾液把96孔板裝回收集板中。把剩余混合液轉(zhuǎn)移至96孔板中。4,000xg離心5分鐘。11.倒棄濾液把96孔板裝回收集板中，加入650μlBufferGW2
8、（已用無水乙醇稀釋）至96孔板的每個孔中。4,000xg離心5分鐘
