豆粕中大豆異黃酮提取工藝研究設(shè)計(jì)

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1、豆粕中大豆異黃酮提取工藝研究大豆異黃酮（Soyisoflavone)是以大豆油渣為原料,經(jīng)過提取分離,加工成含量達(dá)30%-95%的粉狀大豆異黃酮。近年來研究表明大豆異黃酮具有廣泛的生理活性,除其自身作為異黃酮具有的抗氧化作用外,大豆異黃酮作為雌性激素治療的替代品,可以改善婦女更年期綜合癥；其對與激素有關(guān)的腫瘤如乳腺癌和前列腺癌的抑制作用更為顯著受到極大關(guān)注；此外,大豆異黃酮在治療和預(yù)防心腦血管疾病方面也有明顯作用。大豆異黃酮已經(jīng)廣泛應(yīng)用于食品、醫(yī)藥等行業(yè)。大豆異黃酮是多酚類混合物,分為游離型的甙元(Aglycon)和結(jié)合型的糖甙(Gluc

2、osides)兩類。甙元包括染料木素(Genistein)、大豆黃素(Daidzein)和黃豆黃素(Glycitein)。天然情況下它們主要以β-葡萄糖甙形式存在,即染料木甙(Genistin)、大豆黃甙(Daidzin)和黃素黃甙(Glystin),部分異黃酮甙發(fā)生乙酰化、丙二?；?但所有這些大豆異黃酮衍生物經(jīng)酸水解或酶催化分解后都能轉(zhuǎn)化為大豆異黃酮甙元。大豆異黃酮所具有的良好的藥理作用顯示了它具有很大的開發(fā)價(jià)值,通過提取分離大豆異黃酮能充分合理利用大豆中的各種有效成分,提高其附加值,實(shí)現(xiàn)良好的經(jīng)濟(jì)效益和社會效益。目前有關(guān)豆粕的提取工藝

3、主要以乙醇為提取溶劑，由于乙醇系有機(jī)溶劑，消耗大、成本高、且生產(chǎn)過程存在易燃等安全隱患，為此我們根據(jù)豆粕異黃酮有一定的水溶性，試改用水做提取溶劑，以大豆異黃酮為目標(biāo)，對其大豆異黃酮進(jìn)行了正交提取工藝研究，并對最佳提取工藝得到的提取液進(jìn)行了大孔吸附樹脂吸附分離性能研究，以期為豆粕大豆異黃酮的開發(fā)利用提供依據(jù)。1材料與儀器　　1.1材料豆粕(采自陜西石羊公司)，自然干燥，粉碎。　　1.2試劑染料木素和大豆黃素對照品:百靈威化學(xué)；大豆苷元標(biāo)準(zhǔn)品(中國藥品生物制檢定所1502-2001O1)。大孔樹脂ADS-21、ADS-7、D101，AB-8購

4、自西安藍(lán)小科技開發(fā)有限公司。甲醇:色譜純試劑，其余試劑均為分析純?！　?.3儀器天津市泰斯特儀器有限公司FZ102植物粉碎機(jī)；德Sartorius賽多利斯ME235S-電子分析天平；上海亞榮生化儀器廠RE-52AA旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀；上海醫(yī)療器械五廠H·H·S21-6C電熱恒溫水浴鍋；江蘇昆山超聲儀器公司KQ-50DB超聲清洗器；鄭州長城科工貿(mào)有限公司SHB-C循環(huán)水式多用真空泵；日本島津LC-20A型高效液相色譜系統(tǒng)(包括SPD-20A檢測器、LC-20A型高壓恒流泵和LCSolution工作站)；色譜柱:InertsilC18（4.6mm×2

5、50mm，5μm）；日本島津UV-1700紫外可見分光光度計(jì)；日本島津CS—930型薄層色譜掃描儀；日本島津ZF—1型三用紫外分光儀；上海市實(shí)驗(yàn)儀器總廠101A—2型鼓風(fēng)干燥箱；浙江黃巖求精真空泵廠2XZ-2旋片式真空泵；北京醫(yī)用離心機(jī)廠LD5-10高速離心機(jī)；上海悅豐DE-10蒸餾水器；美國Bedford公司Milli-Q超純水制備儀；TGL-16C型高速離心機(jī)；上海滬西分析儀器廠有限公司HL-2恒流泵；上海大龍醫(yī)療器械有限公司PotPette100-1000μl手動單道可調(diào)式移液器；索式提取器；層析柱(16mm×30cm)。2方法2.

6、1大豆異黃酮的薄層檢測大豆異黃酮苷元的薄層檢測硅膠薄板制作稱取4g硅膠GF254置于研缽中，加入0.5%的羧甲基纖維素鈉溶液12ml，研磨15min后鋪于20×10cm的干凈玻璃平板上，要求平整無氣泡，然后晾干即可。展開劑配制取展開劑氯仿-無水甲醇10：0.5的比例配制52.5ml（50：2.5）作為展開劑。薄板活化：將制好的硅膠薄板在105℃下活化30min。點(diǎn)樣：點(diǎn)樣點(diǎn)距板子底端1.5cm左右，所有點(diǎn)樣點(diǎn)位于同一直線上，盡可能向中間靠攏，每個(gè)點(diǎn)樣點(diǎn)點(diǎn)樣約20μl，點(diǎn)樣點(diǎn)盡可能小。飽和：將板子不沒入層析缸內(nèi)的展層劑中，在展層劑的蒸氣中飽

7、和約0.5h。層析：將板子下端插入展層劑中進(jìn)行展開，當(dāng)展層劑前沿距板子上端約1.5cm時(shí)取出板子，自然晾干。觀察：展開取出晾干后，在254nm熒光燈下觀察，斑點(diǎn)呈淺黃色。Rf。2.2紫外分光光度法測定大豆異總黃酮[2][2]張玉梅，孫學(xué)斌，高旭年，等.紫外分光光度法測定大豆異總黃酮的含量[J].中國食品衛(wèi)生雜志.2000，12(4)7-92.2.1標(biāo)準(zhǔn)品溶液的配制及標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精確稱取大豆苷元標(biāo)準(zhǔn)品(中國藥品生物制檢定所1502-2001O1)2.0mg,置于25mL容量瓶中，以甲醇溶解并定容至刻線，搖勻，分別精密吸取標(biāo)準(zhǔn)品溶液0.1，

8、0.2，0.3，0.4，0.6，0.8mL置于10mL容量瓶中，用甲醇稀釋至刻線，搖勻，以甲醇為空自，在254nm的波長處測定A值，以濃度為橫坐標(biāo)，A值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程Y=0.