重慶地區(qū)兔腹瀉病原菌分離鑒定及檢測方法的建立

ID:30887633

大小:1.70 MB

頁數(shù):8頁

時間:2019-01-04

重慶地區(qū)兔腹瀉病原菌分離鑒定及檢測方法的建立_第1頁
重慶地區(qū)兔腹瀉病原菌分離鑒定及檢測方法的建立_第2頁
重慶地區(qū)兔腹瀉病原菌分離鑒定及檢測方法的建立_第3頁
重慶地區(qū)兔腹瀉病原菌分離鑒定及檢測方法的建立_第4頁
重慶地區(qū)兔腹瀉病原菌分離鑒定及檢測方法的建立_第5頁
資源描述:

《重慶地區(qū)兔腹瀉病原菌分離鑒定及檢測方法的建立》由會員上傳分享,免費在線閱讀,更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫

1、重慶地區(qū)兔腹瀉病原菌分離鑒定及檢測方法的建立許國洋1,沈克飛1,徐登峰1,付利芝1,張素輝1,王孝友1,楊柳1*(1.重慶市畜牧科學(xué)院,重慶402460)摘要旨在對重慶地區(qū)兔細(xì)菌性腹瀉病原菌進(jìn)行分離鑒定并建立相應(yīng)檢測方法,為該病的檢測及防控奠定基礎(chǔ)。通過臨床診斷與細(xì)菌分離培養(yǎng)技術(shù),對引起兔腹瀉的病原菌進(jìn)行分離,利用細(xì)菌16SrDNA通用引物擴(kuò)增分離菌16SrDNA基因序列,測序分析后,構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化發(fā)育樹。同時,依據(jù)各病原菌特異性序列設(shè)計引物,建立PCR檢測方法。結(jié)果表明,共分離到4種病原菌,分子生物學(xué)鑒定

2、后分別確定為:銅綠假單胞菌、產(chǎn)氣莢膜梭菌、金黃色葡萄球菌和大腸桿菌;依據(jù)銅綠假單胞菌外毒素eta基因、產(chǎn)氣莢膜梭菌a毒素基因、金黃色葡萄球菌耐熱核酸酶nuc基因和大腸桿菌外膜蛋白eae基因設(shè)計特異性引物,成功建立多重PCR檢測方法,可從4種病原菌基因組混合物中擴(kuò)增出大小分別為1043、324、200和609bp的目的條帶,對目的菌株最低檢出濃度為103cfu·mL-1。對重慶地區(qū)200份臨床樣本進(jìn)行檢測,發(fā)現(xiàn)4種病原菌普遍存在,其中,金黃色葡萄球菌單獨感染檢出率高達(dá)37.6%,金黃色葡萄球菌與大腸桿菌混合

3、感染檢出率達(dá)28%。關(guān)鍵詞兔腹瀉;病原菌;分離鑒定;多重PCR;混合感染,檢出率中圖分類號S852.61文獻(xiàn)標(biāo)識碼:A收稿日期:2018-02-17修回日期:2018-06-02基金項目:重慶市農(nóng)業(yè)發(fā)展基金(16408);重慶市農(nóng)業(yè)技術(shù)推廣與服務(wù)補(bǔ)助資金項目(14461)第一作者:許國洋,男,助理研究員,主要從事畜禽疫病防控及分子生物學(xué)研究。E-mail:guoyangxu@126.com.通訊作者:楊柳,男,副研究員,主要從事畜禽疫病防控及分子生物學(xué)研究。E-mail:yangliuldz@163.co

4、m.近年來,隨著畜牧業(yè)的不斷發(fā)展,養(yǎng)兔業(yè)已成為重慶地區(qū)一項發(fā)展?jié)摿薮蟮漠a(chǎn)業(yè)。但由于重慶地區(qū)的獨特地理特征和濕熱氣候環(huán)境,為病原菌滋生創(chuàng)造了有利條件,成為疫病多發(fā)的主要誘因之一,嚴(yán)重影響?zhàn)B兔業(yè)的健康可持續(xù)發(fā)展。兔腹瀉是一類臨床上表現(xiàn)腹瀉癥狀的疾病,表現(xiàn)為排糞頻繁,糞便稀軟,呈粥樣或水樣便,輕者食欲減退,精神不振,排糞稀軟,呈粥樣或水樣,病兔全身反應(yīng)較輕,虛弱、消瘦、不愛運動[1-3];重者體溫升高,食欲廢絕,精神倦怠,嚴(yán)重腹瀉,呈水樣常混有血液或膠凍樣黏液,糞便惡臭[4]。腹部觸診有明顯痛疼反應(yīng)。呈脫水和

5、衰竭狀態(tài)及自體中毒癥狀,結(jié)膜發(fā)紺,脈博細(xì)弱,呼吸促迫,常因虛脫而死亡[5-6]。目前,兔腹瀉病在重慶地區(qū)有流行趨勢,多發(fā)于幼兔,給養(yǎng)兔業(yè)造成巨大經(jīng)濟(jì)損失。兔腹瀉病種類多樣,病因復(fù)雜,其中,由病原菌導(dǎo)致的細(xì)菌性腹瀉最為重要[7]。兔細(xì)菌性腹瀉主要包括:大腸桿菌病、產(chǎn)氣莢膜梭菌病、泰澤氏菌病、沙門氏菌病、金黃色葡萄球菌病和銅綠假單胞菌病等,其中,以大腸桿菌病和產(chǎn)氣莢膜梭菌病發(fā)生率較高[8]。由于兔細(xì)菌性腹瀉各病原菌致病性與耐藥性差異,導(dǎo)致其在不同地區(qū)呈不同流行趨勢,危害也各有差異,給疫病防控帶來巨大困擾[9]

6、。因此,明確病原,建立有效檢測方法對該病的防控有著重要意義。目前關(guān)于兔細(xì)菌性腹瀉的研究主要是關(guān)于其病原特性和防治措施的,有關(guān)診斷方法的相對較少[10]。傳統(tǒng)病原菌分離鑒定方法費時耗力,成本較高,且易出現(xiàn)漏檢,不能達(dá)到快速診斷的目的。本研究針對重慶地區(qū)兔細(xì)菌性腹瀉病原菌進(jìn)行分離鑒定,并建立檢測方法,為該病的防控奠定理論基礎(chǔ)。1材料與方法1.1試劑細(xì)菌基因組提取試劑盒、2×TaqPCRMasterMix、DL-2000Marker、膠回收試劑盒和胎牛血清,均購自天根生化科技(北京)有限公司;參照許國洋[11]

7、的方法設(shè)計細(xì)菌16srDNA基因序列通用引物,同時,參照銅綠假單胞菌外毒素eta基因[12]、產(chǎn)氣莢膜梭菌a毒素基因[13]、金黃色葡萄球菌耐熱核酸酶nuc基因[14]和大腸桿菌外膜蛋白eae基因[15]設(shè)計特異性引物,引物均由上海生工生物工程有限公司合成,引物信息見表1。表1.引物信息Primerinformation名稱Name引物序列Primersequence產(chǎn)物大小/bpProductsize參考基因GenBank登錄號GenBankIDofreferencegene細(xì)菌通用引物Bacteria

8、universalprimersF:5’-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3’R:5’-ACGGCTACCTTGTTACGACTT-3’1500銅綠假單胞菌PseudomonasaeruginosaF:5’-AGTTGGTCGCTGAACTGGC-3’R:5’-TGCATCTCGTTGCTCTCGTG-3’200KC847698.1產(chǎn)氣莢膜梭菌ClostridiumperfringensP35’-GCTAATGTTA

當(dāng)前文檔最多預(yù)覽五頁,下載文檔查看全文

此文檔下載收益歸作者所有

當(dāng)前文檔最多預(yù)覽五頁,下載文檔查看全文
溫馨提示:
1. 部分包含數(shù)學(xué)公式或PPT動畫的文件,查看預(yù)覽時可能會顯示錯亂或異常,文件下載后無此問題,請放心下載。
2. 本文檔由用戶上傳,版權(quán)歸屬用戶,天天文庫負(fù)責(zé)整理代發(fā)布。如果您對本文檔版權(quán)有爭議請及時聯(lián)系客服。
3. 下載前請仔細(xì)閱讀文檔內(nèi)容,確認(rèn)文檔內(nèi)容符合您的需求后進(jìn)行下載,若出現(xiàn)內(nèi)容與標(biāo)題不符可向本站投訴處理。
4. 下載文檔時可能由于網(wǎng)絡(luò)波動等原因無法下載或下載錯誤,付費完成后未能成功下載的用戶請聯(lián)系客服處理。
关闭