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1、川穹嗪對大鼠心肌肥大JAKSTAT通路作用【摘?！磕康牧私獯粪簩Υ笫笮募》蚀驤AKSTAT通路的影響。方法建立心肌肥大動物模型，40只大鼠隨機分為4組，每組10只,分別為血管緊張素II(AngII)組(給予AngII36mg-kg-1-d-1)、AngII加川穹嗪組(給予AngII36mg?kg-1?d-1,川穹嗪50mg?kg-1?d-l)>AngII加PBS組(給予AngII36mg?kg-1?d-1,PBS50mg?kg-1?d-l)>對照組(給予生理鹽水36mg?kg-1?d-1),計算心肌肥大指數(shù)。培養(yǎng)、鑒定新生大
2、鼠心肌細胞，每天分別給予AngII1X10-7mol/L(AngII2組)、AngII1X10-7mol/L+JI
3、穹嗪1X1O?4mol/L(AngII加川穹嗪2組)，以不加藥物作為對照2組，培養(yǎng)7d,應用RTPCR方法檢測各組大鼠心肌細胞心房利鈉肽(ANP)相對水平，Z)onJAKSTATsignaltransductioninratsyocytehypertrophy.MethodsAcardiomyocytehypertrophy(CH)modeladein40Z50mg?kg-1?d-1;thethird,AngII
4、36mg?kg-1?d-1andPBS50mg?kg-1?d-1;andthecontrol,saline36mg?kg-1?d-1.Myocardialhypertrophyindex(MHI)ol/L;thesecond,AngII1X10-7mol/LandTMZ1X10-4mol/L;andthecontrol,nomedicinegiven.TherelativelevelofofatrialnatriureticpeptideoleculesanalysedbyZgroupdecreased(q=7.53,P<
5、;0.01).ThedifferencesoftheexpressionsofpJAKl,pJAK2andpSTAinAngIIgroup,beforeandafterSMZaided,yocytehypertrophybyinterferingJAKSTATsignaltransduction.［KEYyocytes,cardiac;Hypertrophy;AngiotensinII;Signaltninsduction;Tetramethylpyrazine心肌肥大是血流動力學負荷增加使心臟產(chǎn)生的長期反應，涉及到以心肌細胞
6、體積增大為特征的重塑過程，是啟動心力衰竭一個病理過程［1］。近年來研究顯示，有許多信號通路在心肌肥大和心力衰竭過程中起重要作用，其中JAKSTAT通路在心臟疾病發(fā)病機制中的作用倍受關注［2］。人們對這一通路進行的研究顯示，許多細胞因子及非免疫性生物化學遞質(zhì)都能激活JAKSTAT信號通路，從而啟動相應的基因轉(zhuǎn)錄直接激活心肌肥大(代償性)和細胞生存相關基因［3］。天然四甲基毗嗪又名川穹嗪，為中藥川穹的主要有效成分,具有改善心功能和血流動力學功能作用［4］。川穹嗪治療心血管病方面研究目前僅限制在細胞水平，本文研究川穹嗪與心肌肥大JA
7、KSTAT通路之間的聯(lián)系，現(xiàn)將結(jié)果報告如下。1材料和方法1.1材料成年EM/F12細胞培養(yǎng)基購自Gibco公司;小牛血清(BS)購自杭州四季青生物制品有限公司;抗體：兔抗人磷酸化JAK/STAT一抗購自美國SantaCruz公司;HRP偶聯(lián)或熒光二抗購自Amersham公司(Buckinghamshire,UK)。本文所用引物均由上海Sangon公司合成。PCR引物序列為：ANP正義鏈：5’GGCTCCTTCTCCAT2CACCAA3’，反義鏈：5’TGTTATCTTCGGTACCG3’，產(chǎn)物大小458bp。總RNA抽提試劑T
8、rizol購自GibcoBRL公司，RTPCR試劑盒購自Promega公司。1.2方法1.2.1建立心肌肥大動物模型將40只成年EM培養(yǎng)液稀釋，并加入0.1mol/LBRDU以抑制非心肌細胞的增殖，然后將細胞均勻地接種于25mL培養(yǎng)瓶中，置于37°C,含體積分數(shù)0.05CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2d,棄原液，用無血清DMEM液洗2次，用含體積分數(shù)0.15胎牛血清的DMEM培養(yǎng)2d。分為4組，各10例。①對照2組：加入培養(yǎng)液5mL;②Angll2組：加入AngII0.5ng,培養(yǎng)液5mL,Angll終濃度為1X10-7mol/L;③An
9、gII加川穹嗪2組：分別加入AngII0.5ug,川穹嗪64Ug,培養(yǎng)液5mL,AngII終濃度為1X10-7mol/L,川穹嗪終濃度為1X10-4mol/L。每24h加藥1次,每48h換液1次，于加藥后第7天收集心肌細胞，提取總RNAo1.2.4RTPCR檢測心肌細胞ANP
