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《大蒜素對痢疾桿菌抑菌作用和其機制初步探析》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫。
1、大蒜素對痢疾桿菌抑菌作用和其機制初步探析【摘要】目的：觀察大蒜素對痢疾桿菌的抑菌效果,初步探討大蒜素的抑菌機制。方法：采用K~B紙片法、液體稀釋法檢測大蒜素對痢疾桿菌的抑菌效果及最小抑菌濃度(MIC)值；采用SDS-PAGE電泳法，觀察大蒜素作用下菌體蛋白質(zhì)電泳圖譜的變化。結(jié)果:大蒜素對痢疾桿菌的抑菌環(huán)直徑為15.3±1.676305mm,MIC值為100ug/ml,在SDS-PAGE中，大蒜素作用后，痢疾桿菌的蛋白圖譜有變化。結(jié)論：大蒜素對痢疾桿菌有抑菌作用，并影響菌體蛋白質(zhì)的合成，初步揭示了大蒜素的作用機制
2、?！娟P(guān)鍵詞】大蒜素；SDS-PAGE；抑菌機制；痢疾桿菌志賀菌屬細菌通稱痢疾桿菌，是一類具有高度傳染性和危害嚴(yán)重的革蘭陰性腸道致病菌，臨床感染可導(dǎo)致細菌性痢疾(菌痢)。菌痢是世界上，尤其是發(fā)展中國家重要的傳染病之一，全球每年的病例超過1.6億，并導(dǎo)致100萬患者死亡，其中絕大數(shù)為5歲以下的兒童［1］。目前，人們長期濫用抗生素造成了嚴(yán)重菌群失調(diào)和藥物不良反應(yīng)，因此，尋找一種不良反應(yīng)少又有效的抗菌藥物，是醫(yī)學(xué)界努力的方向。大蒜為百合科植物，含有豐富的營養(yǎng)物質(zhì)，又具有很高藥用價值。原在法國、埃及等地早就用來佐餐、預(yù)防
3、疫彷，秦漢時期傳人我國，我國食用大蒜及用大蒜治療疾病歷史悠久，據(jù)《本草綱目》記載，大蒜有解毒散臃腫、消毒氣、除風(fēng)破冷、健脾治世等功效［2］。研究表明，大蒜抗菌的有效成分是大蒜素。本研究主要觀察大蒜素對痢疾桿菌的抑菌作用，并對其抑菌機制進行了初步探討。1材料與方法1.1材料大蒜素（江蘇正大清江制藥有限公司）；福氏痢疾桿菌（本室保存，菌號：51571-10）；營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、MH瓊脂培養(yǎng)基、MH肉湯培養(yǎng)基（北京奧博星責(zé)任股份有限公司）;過硫酸鐵、冰醋酸（天津市百世化工有限公司）；TEMED、丙烯酰胺、甲叉雙丙烯酰胺
4、、Tris.SDS、B-硫基乙醇、考馬斯亮藍R-250（艾勒科技有限公司）；甲醇（天津市科銳思精細化工有限公司）；蛋白Marker（北京鼎國盛生物技術(shù)有限責(zé)任公司）；濾紙1?2儀器電泳槽（北京六一儀器廠，型號DYCZ-24DN）,電泳儀（北京六一儀器廠，型號DYY-6B型），搖床。1.3方法1.3.1大蒜素對痢疾桿菌的抑菌作用1.3.1.1菌懸液的制備福氏痢疾志賀菌于營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基平板培養(yǎng)37°C18-24h,用無菌生理鹽水將新鮮平板培養(yǎng)物洗下，以MH肉湯培養(yǎng)基制成濃度為1.6X106cfu/ml的菌懸液。1.
5、3.1.2大蒜素液的制備用MH肉湯培養(yǎng)基溶解大蒜素粉末，制成0.5mg/ml的大蒜素液，備用。1.3.1.3大蒜素藥敏紙片的制備將濾紙剪成直徑為0.6cm的圓形紙片，12TC20mins高壓滅菌冷卻后，浸入上述大蒜素液中浸泡，備用［3］。1.3.1.4MH瓊脂培養(yǎng)基制備將MH瓊脂培養(yǎng)基粉末加蒸館水溶解后，12TC20mins高壓滅菌，冷卻至約5(TC后注入120mm的玻璃培養(yǎng)皿中，待凝固后備用。1.3.1.5抑菌作用取lml上述濃度的菌懸液，涂布法均勻接種于MH瓊脂培養(yǎng)皿中，將大蒜素藥敏紙片貼于培養(yǎng)皿中心處，3
6、79培養(yǎng)24h后，測量抑菌圈的大?。?］。1.3.2測量大蒜素的最小抑菌濃度(MIC)采用液體稀釋法，制備含不同濃度的大蒜素MH肉湯培養(yǎng)液，然后向各濃度的肉湯中加入實驗菌懸液并混勻，于37￡培養(yǎng)24h后，觀察其是否有菌落生長，細菌不生長的最高稀釋度為大蒜素的最低殺菌濃度。1.3.3SDS-PAGE電泳試驗配制10%的聚丙烯酰胺凝膠［5］,將1.3.2中含大蒜素的菌體及空白對照與等體積上樣緩沖液混合后，經(jīng)沸水浴5mins,與10000r/min離心lmin,取上清上樣，每孔30U1,進行電泳。然后用考馬斯亮藍染色
7、液染色3h,再脫色，觀察結(jié)果。2結(jié)果2.1表1大蒜素對福氏痢疾志賀菌的抑菌情況3結(jié)論3.1大蒜素對痢疾桿菌的抑菌作用用K-B法初步檢測大蒜素對痢疾桿菌是否有作用，從表1中可以看出大蒜素對痢疾桿菌有一定的抑菌作用，其抑菌環(huán)直徑為15.3±1.676305mm。3.2測量大蒜素的最小抑菌濃度(MIC)用液體稀釋法檢測大蒜素對痢疾桿菌的最小抑菌濃度應(yīng)該為100ug/ml3.3對最小抑菌濃度的培養(yǎng)物和沒有加藥的陰性對照進行的SDS-PAGE可以看出在2-105kD中間有幾條蛋白條帶有缺失或者降低的情況，說明藥物可能作用
8、于該位置上，從而干擾細菌的增殖。4討論目前，關(guān)于菌痢的確切發(fā)病機制尚未明確，國外學(xué)者研究認(rèn)為，痢疾桿菌的感染可能包括以下過程［6-8］：k痢疾桿菌通過微皺褶細胞進入結(jié)腸粘膜，Sansonetti等［9］發(fā)現(xiàn)具黏附性而無侵襲性的痢疾桿菌變異株：BS15感染后，M細胞伸展似一大口袋裝，其內(nèi)含有大量的單核細胞；2、定植的巨噬細胞吞噬痢疾桿菌后發(fā)生凋亡，釋放炎癥因子，H訂b訂等［10］發(fā)現(xiàn)LP
