大蒜素提取與抑菌試驗方案（大蒜素實驗）2

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1、大蒜素提取與抑菌試驗方案、大蒜素液制備二、提取1材料與方法1.1材料1?1?1菌種。金黃色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)人腸桿菌1.1.2培養(yǎng)基。MH肉湯培養(yǎng)基(購白上海順勃生物工程技術有限公司)營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基：牛肉膏3g,蛋白月東5g,蒸傑水1L;牛肉膏蛋白J］東培養(yǎng)基：牛肉膏3g,蛋白10g,氯化鈉5g,蒸鐳水1L。1.2方法1.2.2常規(guī)提取法1.2.2.1水煮萃取法。稱取大蒜干粉150g放入1L三角瓶中，加入450ml去離子水，在水浴鍋中50%恒溫90min?每隔15min攪拌一

2、次，抽真空過濾得到濾液；濾渣放回三角瓶中，再加入200m】去離子水，在水浴鍋中50*恒溫60min,過濾得到濾液，重復一次。把全部得到的濾液合并在一起共得濾液800ml,分裝到兩個1.0L的萃取分液漏斗中，用石油醯：乙醛：乙酸乙酯(v/v/v)為30：9：1的混合試劑與濾液以1：l(v/v)混合萃取，得到有機相(上相)，重復操作一次。萃取所得有機相用旋轉蒸發(fā)儀濃縮至50ml左右,轉移到100ml小三角瓶中，放入干燥箱中50X干燥至無有機溶劑氣味，即得大蒜干粉粗提物。(2)抑菌試驗1.2.2?菌懸液的制備。1.

3、金黃色衙萄球菌接種于牛肉膏蛋白丿凍培養(yǎng)基，2.37°C培養(yǎng)24h,3.用接種環(huán)挑取形態(tài)相似菌落3?5個，接種于4?5ml的水解酪蛋白(MH)肉湯中4.37°C孵育2?6h,5.增菌后的對數(shù)生長期菌液用生理鹽水配制成吸光值(0D)為0.1的菌懸液6.使用時稀釋10倍。2抑菌試驗在無菌條件下，將固體培養(yǎng)基加熱熔化，當溫度降到45°C時，分別注入大腸桿菌和金黃色葡萄球菌菌懸液各10訛?；靹蚝笱杆俚蛊桨迦舾蓚€，制成若干個分別含有大腸桿菌和金黃色葡萄球菌的培養(yǎng)基。待培養(yǎng)基凝固后，用無菌的打孔器在每個培養(yǎng)基中打直徑為0.

4、7cm孔5或3個皿。標記備用.用無菌移液槍吸取不同濃度的大蒜研磨液各75ML,分別注入五個孔中，32°C恒溫箱中培養(yǎng)24h1111。觀察記錄抑菌大小，重復3次，取其平均值。2不同溫度、PH、蒜液濃度處理實驗2.1不同溫度蒜液抑菌效果比較1、取蒜葉稱lOOglO組，2、加100ml水分別于20°C、30°C、40°C、50°C、60°C、70°C、80°C、90°C、100°C蒸煮30mine3、10組取出后分別3500r/min離心10min,4、取上層清液真空抽濾2次，收集濾液，過濾火菌。5、10組大蒜液，

5、每組每個溫度分別進行抑菌圈試驗。6、作圖：同一濃度同一PH下，不同蒜葉處理溫度卜的抑菌圈的大小。2.2不同濃度蒜液抑菌效果比較1、取蒜粉稱100g5組，2、加100ml水100°C蒸煮30min。3、5組取出后分別3500r/min離心10min,4、取上層清液真空抽濾2次，收集濾液，過濾滅菌。5、5組大蒜液再分別配成100%、80%、60%、40%、20%的溶液,每組每個濃度分別進行抑菌圈試驗。6、作圖：在同一個溫度和PH下，不同蒜葉濃度處理的抑菌圈的大小。2.3不同PH處理后的蒜液抑菌效果比較1、取蒜粉稱

6、100g8組，2、加不同PH值緩沖溶液處理，PH分別為2、3、4、5、6、7、8、9等8個PH梯度,3、100°C蒸煮30min。4、8組取出后分別3500r/min離心10min,5、収上層清液真空抽濾2次，收集濾液，過濾滅菌。8組大蒜液每組每個分別PH梯度進行抑菌圈試驗。6、作圖：在同一個溫度下，同一個濃度下，不同PH處理的蒜葉抑菌圈的大小。1.1.3試劑。磷酸氫二鈉，磷酸二氫鈉(磷酸二氫鉀)。1.2.1大蒜溶液與大蒜素的測定収蒜葉稱10g,加10ml磷酸鹽緩沖液(pH7.8),后3500r/min離心1

7、0min,取上層清液真空抽濾2次，收集濾液，過濾法滅菌，備川。川定硫法測定人蒜索含量。(1)大蒜素提取方案一定硫法1實驗部分1、1測定原理大蒜中蒜氨酸的亞楓勲)SO+))和人蒜索的硫代亞佩基()SO+)S)被濃硝酸氧化成硫酸離了，與氯化鎖反應形成硫酸鈔!沉淀，根據硫酸鍥的重最換算出人淼素的含最。1、2試劑硝酸(GR),1()%氫氧化鈉(AR),氯化鈉(AR),甲基橙(AR)、硝酸銀溶液15%氯化頓液，1、3測定方法1.將蒜葉，準確稱取5g(精確至0.0001g),2.加濃硝酸3ml?4ml,用玻璃棒攪拌至黃色

8、，放置20min,3.過濾并洗入100ml容量瓶中,定容至刻度。4.吸取濾液80ml,放入150ml燒杯中5.，加().1%甲基橙指示劑5滴，6.滴加10%氫氧化鈉溶液至黃色，用1:1鹽酸調節(jié)pH=2?3Z間。7.在電爐上加熱微沸，趁熱加入10ml15%氯化頓液，攪拌均勻，8.在90。水浴上保溫2h,9.川定量(無灰)濾紙過濾,川熱去離子水洗至無氯離子(濾液加硝酸銀溶液不混濁為止)，1.將沉淀同濾紙