反義寡核苷酸肝靶向制劑的研究

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1、關(guān)于學位論文獨立完成和內(nèi)容創(chuàng)新的聲明本人聲明所星交的學位論文是本入在導師指導下避行的研究工作及取得的研究成果。除了文中特別加以標注和致謝的地方外，論文中不包會其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包禽為獲得任何教霄橇椽約學位或迸書覆使曩過戇囂瓣。與我一目王籜過靜同恚對零研究所做的任何貢獻融在論文中作了明確的說明并表永謝意。學像論文終謄簽名t簽字酲期：年秀曩學位論文版權(quán)使用授權(quán)書論文《反義寡核瞥酸野靶商制裁魏研究》系韭學院鎣趔堂專業(yè)蕉塞垡在沈陽藥瓣大學攻讀搏圭登／該圭召學位瑟完成的作品。本學位論文作者完全了解學校有

2、關(guān)保留、使用學位論文的規(guī)定，同意學校保留并向國家肖關(guān)部門或機構(gòu)送交論文的復印件和電子版，允許論文被套閱彝氆闋。零入授權(quán)沈陽芬麓大學習班贅本攀健論文酶全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復制手段保存和匯編本學飯論文。本學位論文羼予l、保密口，在豳墨年／口五／年解密后適用本授權(quán)書。2、不保密口。(請在以上相應方框內(nèi)打“4”>作者簽名：聊娩2脅年月日年月日澆瓣羲禱走擘誨奄擎往磚文轄喀詞表縮略詞表童簍莖莖查耋壅妻釜塞苧耋：塞!窯童2查堡墼墼叁蘭蘭圭蘭!!：堅蘭圭蘭耋摘要反義寡核苷酸是匿魏發(fā)展迅

3、速的基露淤療藥秘，與傳統(tǒng)藥物穗魄，壹接作用予產(chǎn)生蛋鑫魏基囂，閔鼗受昊有逵擇毪黎搿效低毒經(jīng)。莛冀努予爨夫、求溶霞羧及分予表面帶有很強的綴電荷，使其在實際應用中存在穩(wěn)定忮麓、細胞膜通透率低和產(chǎn)生非特異性的毒剮作用等問題?；陉犐显?，本課題患騷針對survivinmRNA編碼區(qū)438位合成反義寡核苷酸，并將堿性氨基酸(寡聚賴氨酸)共價稻騷臻拳溶往復義寡援努黢，摹l爰多聚粥瓷予憝芬正電性質(zhì)，獲囂套效戇增熱滕璇棒的包封率，提高繃胞膜靜通透性。忿靜，以十，k烷基結(jié)合舉巍糖為入翳癌細胞的靶向配體并嵌和猩月旨質(zhì)體膜上，利用JI

4、千膿細胞表面表達的畿唾液酸糖蛋白受體，構(gòu)成導向性轉(zhuǎn)運系統(tǒng)。構(gòu)成配體．脂質(zhì)體．多聚陽離子聚合物-DNA的復合物，健遴茨義寡棱苷酸對靶凝閑的親饔力以及緦胞膜的通透性，實現(xiàn)基因治療的匿豹。本論文主要包括以下內(nèi)容：1反義寡核苷酸、聚賴氨酸修飾反義寡核苷酸和肝靶向西已體的合成。聚甩適合批量生產(chǎn)的溉磷酰胺方法合成反義寡核營酸(5’cgatggCaCggegcactt3’)。該會畿方法麓摹，醞褥產(chǎn)耱綴菇效滾程縫純瑟綣淀迭瑟98％鞋主，uv、承和MS鑒定，確認為目標純舍戇。筏理化性質(zhì)研究中，測定反義寡核替醴油水分配系數(shù)為O．13

5、；等電點為2．24～2．36；穩(wěn)定性實驗研究液明，光照條件和離溫條件影響反義寡核瞥酸的穩(wěn)定性，應讖光4"C保存。均分子量為1000，2000和10000的聚簸氨酸修飾反義寡梭螢酸，通過酶連羧籜氧像還源反應，騫棱營酸豹3’寒糕凝簸氨酸豹緩聯(lián)率為28～32％；反義騫核箭黢聚賴氨酸修飾物的雜交性質(zhì)研究緒聚夜明，與未修飾的反義寡核苷酸相比，聚賴氨酸修飾的威義寡核苷酸Tm值略肖下降，但幅度不火，+修飾后的反義寡核枯酸仍能形成穩(wěn)定的雜交。孥k糖酸鑣窩疆鶩黢舞藤餐囊l備了配髂艫卡，℃酸巍糖藏(N-SIVA)，魏方法簡單弱行，產(chǎn)

6、物易于絕化。并應用IR、1H-NMR、DSC和TO替方法對N-SLBA進彳予結(jié)構(gòu)確證。2以反義寡核苷酸為模型藥物，包封舉為指標正交設(shè)計優(yōu)化脂質(zhì)體處方，并3澆辯鴦籜大攀搏擊擘秣語吏串文糖要確定最佳處方和工藝。薄膜分散法制備了脂質(zhì)體(CLO)、肝靶向脂質(zhì)體(NID)、均分子量為1000的聚賴氨酸修飾反義寡核苷酸肝靶向脂質(zhì)體(NLO*LLl)、均分子量為2000的聚賴氨酸修飾及義寡核苷酸肝靶向滕質(zhì)體(NLO-PL心)翻均分予量務10000戇聚羧氨酸摻鎊獲義寡竣營酸器靶蠢l簿笈薅(NLO-PL璐)等翱劑，考察了CLO、N

7、LD、NLO．PLLl、NLO．PLL2翻NI．D．PL王3盼融汜能質(zhì)。實驗結(jié)果表明，聚賴氨酸均分予爨為1000、2000和10000修飾的反義寡梭背酸的艏質(zhì)體包封率提高到12％、18％和44％；同時顯著改變脂質(zhì)體的‘電能，分別羹一12。6±氈9徽V，-10。6±1．2mV，o．6±l。ImV，42士13mY窩堇4。9±1．7mV：但對粒輕為禿髭著影嚷，CLO、NLO、NLO-PLLl、NLO．PLL2瘸NLo增娃3酶粒徑分別為124±2811111，137±32nm，126±41nm，139出34枷和142±2

8、5nln。以上研究結(jié)果說明，隨著聚賴氨酸長度的增加，有效的提高反義寡核苷酸的脂質(zhì)體包封率，但掇慧幅度各不相同。遂是因為不同長度的寡聚賴氨酸共價偶聯(lián)剃農(nóng)溶經(jīng)夏義寡孩蝥羧君，多聚疆棗予豹耱歪宅苓磊程囊耱巾秘了反義寡菝蓑羧豹芬受電，導致降低反義寡核苷酸與脂威體膜斥力作用也備不相同，因而產(chǎn)生了包封率的差異性。3DiI為袋光染料標記脂質(zhì)體，采用流式細胞儀技術(shù)對N-SLBA修飾豹脂質(zhì)