mtor信號通路調(diào)控膠質(zhì)瘤干細胞自我更新和替莫唑胺耐藥分子機制的研究

《mtor信號通路調(diào)控膠質(zhì)瘤干細胞自我更新和替莫唑胺耐藥分子機制的研究》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。

1、中山大學(xué)博士學(xué)位論文mTOR信號通路調(diào)控膠質(zhì)瘤干細胞自我更新和替莫唑胺耐藥的分子機制研究姓名：付軍申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：腫瘤學(xué)指導(dǎo)教師：陳忠平20090525中山大學(xué)博士學(xué)位論文mToR信號通路調(diào)控膠質(zhì)瘤千細胞自我更額和替莫唑胺耐藥的分子機制研究mTOR信號通路調(diào)控膠質(zhì)瘤干細胞自我更新和替莫唑胺耐藥的分子機制研究中文摘要目前，高級別膠質(zhì)瘤的總體治療效果仍不理想，生存期短，復(fù)發(fā)率及死亡率高，特別是膠質(zhì)母細胞瘤的平均牛存時間還沒有超過一年。替莫唑胺是近年來高級別腦膠質(zhì)瘤化療推薦藥物。雖然替莫唑胺能延長患者無進展生存時問，但對整體生存期改善極為有限。

2、如何進一步提高高級別膠質(zhì)瘤的化療效果，延K患者生存時間已成為目前神經(jīng)腫瘤的重點研究方向。膠質(zhì)瘤干細胞是膠質(zhì)瘤的種子細胞，在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過程中起決定性作用，也是膠質(zhì)瘤對化療產(chǎn)生耐受以及復(fù)發(fā)的根源。腫瘤干細胞能憑借其自身更新能力和處于靜止期的特性，逃脫藥物殺傷作用，從而在放化療后導(dǎo)致腫瘤的復(fù)發(fā)。針對膠質(zhì)瘤干細胞自我更新的相關(guān)分子機制研究，是闡明其致瘤原理的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，并將為開發(fā)有效治療膠質(zhì)瘤的藥物提供明確的切入點。mTOR(mammalJantargetofrapamycin)信號通路整合生長因子，營養(yǎng)，能量和應(yīng)激信號，調(diào)控蛋白質(zhì)合成，細胞生長和增

3、殖。mTOR信號通路異常活化和高級別膠質(zhì)瘤的發(fā)生以及預(yù)后不良相關(guān)。臨床研究表明，mTOR抑制劑能夠延長復(fù)發(fā)膠質(zhì)母細胞瘤患者牛存時間。目前，有關(guān)mTOR信號通路調(diào)控膠質(zhì)瘤干細胞自我更新的研究報道甚少。mTOR信號通路能否調(diào)控膠質(zhì)瘤干細胞自我更新和分化?該通路是否和膠質(zhì)瘤干細胞對替莫唑胺耐藥有關(guān)?本研究圍繞膠質(zhì)瘤干細胞自我更新這一熱點領(lǐng)域，探討mTOR信號通路調(diào)控膠質(zhì)瘤干細胞自我更新和替莫唑胺耐藥相關(guān)分子機制。中山大學(xué)博士學(xué)位論文roTOR信號通路調(diào)控膠質(zhì)瘤干細胞自我更新和替莫唑胺耐藥的分子機制研究第一部分膠質(zhì)瘤干細胞分離、體外培養(yǎng)、鑒定和異種腫瘤移

4、植模型目的：從人腦膠質(zhì)瘤組織和細胞株中分離腦膠質(zhì)瘤干細胞、進行體外培養(yǎng)并鑒定其生物學(xué)特性，以及制作異種腫瘤移植模型。方法：采用以CDl33免疫磁珠分選技術(shù)從人腑膠質(zhì)瘤組織和細胞系SKMG一4中分離腦膠質(zhì)瘤干細胞并進行體外無血清培養(yǎng)，通過免疫熒光技術(shù)檢測分子標志物CDl33、Nestin、Sox-2以及譜系分化標志物TuJl和GFAP；建立裸鼠皮下和腦原位移植模型研究膠質(zhì)瘤干細胞的致瘤性。結(jié)果：經(jīng)CDl33免疫磁珠分選的CDl33+細胞群在膠質(zhì)瘤干細胞培養(yǎng)液中呈懸浮生K，培養(yǎng)24--一48小時，可見腫瘤球，能連續(xù)傳代并保持較好的增殖牛長能力；膠質(zhì)瘤

5、干細胞培養(yǎng)液培養(yǎng)的CDl33一細胞群中大部分細胞呈貼壁生長，未見明顯腫瘤球形成，一般無法繼續(xù)傳代培養(yǎng)或僅能傳l～2代。免疫熒光染色結(jié)果表明，來源于0814、0816、0508和SKMG-4的腫瘤標本經(jīng)CDl33分選后培養(yǎng)的膠質(zhì)瘤干細胞高表達神經(jīng)干細胞標記CDl33、Nestin和Sox一2，其中CDl33染色的陽性細胞率分別為88．2±4．5％、78．3±5．2％、90．3±4．6％和85．6±5．5％，Nestin為95．5±5．5％、85．2±4．8％、96．2±5．2％和90．6±4．8％；分化譜系標記GFAP和TuJl表達較低，著色細胞含

6、量均低于10％。CDl33和Nestin免疫染色較強的細胞豐要分布于腫瘤球表面。不同數(shù)量的CDl33+膠質(zhì)瘤干細胞(103個)和CDl33一膠質(zhì)瘤細胞(105個)注射于BALB／C裸小鼠背側(cè)皮下，處死動物解剖檢視，結(jié)果表明，來源于SKMG一4、0814、0816和0508的膠質(zhì)瘤于細胞皮下注射103個細胞均能成瘤；105個CDl33’膠質(zhì)瘤細胞移植后8周，裸鼠皮下亦未見明顯腫瘤形成。膠質(zhì)瘤干細胞顱內(nèi)移植后4周，分離取得裸鼠腦組織后行冰凍切片和H&E染色，移植瘤與親本腫瘤HE染色觀察比較，其病理表犁與親本腫瘤一致。結(jié)論：人腦膠質(zhì)瘤組織和膠質(zhì)瘤細胞株

7、中存在的少量CDl33+膠質(zhì)瘤細胞是膠質(zhì)瘤干細胞。中山大學(xué)博士學(xué)位論文mTOR信號通路調(diào)控膠質(zhì)瘤千細胞自我更新和替莫唑胺耐藥的分子機制研究第二部分mTOR信號通路調(diào)控膠質(zhì)瘤干細胞自我更新的分子機制研究目的：研究roTOR信號通路調(diào)控膠質(zhì)瘤干細胞自我更新相關(guān)的分子機制方法：Westernblot檢測mTOR信號通路組分P—S6K、p-S6和干細胞自我更新相關(guān)基兇Bmi-1的表達水平；建立ETOR通路干預(yù)模型：激活模型(慢病毒導(dǎo)入Rheb基因)和卜．調(diào)模型(Rapamycin，RPA)，腫瘤球形成試驗評價干預(yù)mTOR信號通路對膠質(zhì)瘤干細胞自我更新的影

8、響；建立Bmi一1慢病毒shRNA干預(yù)模型，腫瘤球生成試驗檢澳1]Bmi-1基岡沉默對膠質(zhì)瘤干細胞自我更新的影響；免疫熒光檢測CDl33