同種異體脫細(xì)胞氣管基質(zhì)移植的研究

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1、原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明：所呈交的學(xué)位論文，是本人在導(dǎo)師的指導(dǎo)卜．，獨(dú)j辦j進(jìn)行研究所取得的成果。除文中已經(jīng)注明引用的內(nèi)容外，本論文彳<包含仃fil』其他個(gè)人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的科研成果。對(duì)本文的研究作出重要貞獻(xiàn)的個(gè)人和集體，均已在文中以I歸確方式標(biāo)明。本聲明的法律責(zé)f『?小人水扯i。淪義作者簽名：主盤聿El期：堅(jiān)蘭二!二穸關(guān)于學(xué)位論文使用授權(quán)的聲明本人完全了解山東大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，同意學(xué)校保留或向國家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版，允許論文被禽閱和借閱；本人授權(quán)山東大學(xué)可以將本學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)

2、庫進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或其他復(fù)制手段保存論文和匯編本學(xué)位論文。(保密論文在解密后應(yīng)遵守此規(guī)定)淪丈作者簽名：址導(dǎo)師簽期：o)哆一，，∥山東大學(xué)碩二L學(xué)位論文同種異體脫細(xì)胞氣管基質(zhì)移植的研究碩士研究生：于慶平專業(yè)：外科學(xué)(整形)導(dǎo)師：霍然教授中文摘要目的：長段氣管缺損之后的形態(tài)與功能重建，是困擾臨床醫(yī)師多年的難題。隨著同種異體器官移植研究的發(fā)展，同種異體氣管移植逐漸被視為長段氣管重建的較為理想的方法。但是，宿主對(duì)同種異體氣管的免疫排斥以及移植段氣管的再血管化是現(xiàn)代氣管移植研究尚未解決的兩個(gè)難題。我們分別應(yīng)用改良的Courtman氣管黏

3、膜脫細(xì)胞方法以及程序深低溫凍存方法對(duì)同種異體氣管段進(jìn)行處理，并將處理過的氣管段進(jìn)行原位移植，對(duì)移植效果進(jìn)行觀察。以期尋找一種較為有效的降低同種異體氣管免疫原性的方法，為長段氣管缺損后形態(tài)與功能重建提供一種新思路。方法：本實(shí)驗(yàn)用Bee91e犬共分為三組：A組為新鮮氣管移植組(n=5)、B組為冷凍氣管移植組(n=5)和C組為改良的Courtman方法黏膜脫細(xì)胞氣管基質(zhì)移植組(n=5)。新鮮移植組：新鮮同種異體氣管未經(jīng)處理，直接行原位移植；冷凍氣管移植組：移植段氣管經(jīng)程序降溫后，先放入一196℃的液氮中冷凍保存6周，再復(fù)溫后原位移植；改良的Cou

4、rtman方法氣管黏膜脫細(xì)胞處理移植組：先經(jīng)非離子型表面活性劑TritonX一100、酶制劑聯(lián)合處理黏膜脫細(xì)胞后再原位移植。觀察指標(biāo)及方法有：(1)組織學(xué)切片HE染色觀察經(jīng)不同方法處理后的各組氣管段樣本的黏膜及軟骨部分光鏡結(jié)構(gòu)變化；(2)原位移植術(shù)后觀察宿主犬的生存狀況，記錄咳嗽、氣短出現(xiàn)的時(shí)間及變化，行X線攝片觀察移植段氣管狹窄情況。(3)氣管原位移植術(shù)后，在不同時(shí)相抽取宿主犬周圍靜脈血，應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢查淋巴細(xì)胞亞群，分析CD3+、CD4+、CD8+T淋巴細(xì)胞亞群的變化。(4)宿主犬死亡或處死后，將氣管移植段耿出，觀察大體改變，氣管狹窄

5、程度，組織切片HE染色觀察移植段氣管黏膜與軟骨結(jié)構(gòu)山東人學(xué)碩士學(xué)位論文改變。結(jié)果：(1)各實(shí)驗(yàn)組移植段氣管處理后的移植術(shù)前的光鏡結(jié)構(gòu)變化：新鮮氣管組HE染色可見氣管黏膜表面排列整齊的假復(fù)層柱狀纖毛上皮細(xì)胞，黏膜及黏膜下層基質(zhì)細(xì)胞、腺細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞保存完好，軟骨部分結(jié)構(gòu)致密，可見軟骨細(xì)胞單獨(dú)或多個(gè)生長于軟骨陷窩內(nèi)；冷凍段氣管見黏膜纖毛柱狀上皮部分脫失，黏膜下層結(jié)構(gòu)保存完好，軟骨細(xì)胞未見明顯破壞；改良的Courtman方法氣管黏膜脫細(xì)胞處理組氣管段樣本見黏膜及黏膜下層內(nèi)細(xì)胞成分完全脫失，HE染色黏膜部分僅見紅染黏膜脫細(xì)胞基質(zhì)，軟骨細(xì)胞無明顯

6、破壞。(2)原位移植術(shù)后宿主犬生存情況觀察：新鮮氣管移植組宿主犬均于術(shù)后7天出現(xiàn)明顯咳嗽，于14天左右呼吸困難較明顯，行X線攝片見移植段氣管狹窄超過50％，均于3周內(nèi)死亡。冷凍氣管移植組宿主犬約2周左右出現(xiàn)咳嗽等癥狀，呼吸稍快，4例犬術(shù)后分別于2月內(nèi)死亡，X線片檢查見有不同程度的狹窄。改良的Courtman方法氣管黏膜脫細(xì)胞處理組宿主犬術(shù)后呼吸平穩(wěn)，2月左右時(shí)有不同程度的氣短，2例犬術(shù)后長期無明顯臨床癥狀，不咳、無氣短等呼吸道癥狀，均存活至3月，X線片檢查見移植段氣管僅輕微狹窄。(3)各實(shí)驗(yàn)組不同時(shí)相周圍靜脈血流式細(xì)胞儀檢測(cè)CD3+、CD4

7、+、CD8+T淋巴細(xì)胞亞群的變化：新鮮氣管移植組宿主犬CD3+、CD4+T淋巴細(xì)胞數(shù)在術(shù)后第7天較術(shù)后第1天稍增加(尸>0．05)，無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；CD4+／CD8+比值亦增高(尸>0．05)，無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；術(shù)后14天時(shí)較第一天均顯著增加(尸<0．05)，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。冷凍氣管移植組宿主犬CD3+、CD4+T淋巴細(xì)胞數(shù)在術(shù)后第7天較術(shù)后第1天稍增加(尸>0．05)，無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；CD4+／CD8+比值亦增高(尸>0．05)，無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；術(shù)后14天時(shí)較第1天均顯著增加(尸<0．05)，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。改良的Courtman方法氣管黏膜脫細(xì)胞處理

8、移植組宿主犬CD3+、CD4+、CD8+T淋巴細(xì)胞數(shù)及CD4+／CD8+比值術(shù)后變化不明顯。(4)各實(shí)驗(yàn)組移植術(shù)后移植段氣管的大體及組織學(xué)變化：A組犬移植段氣管大體觀可見氣管軟骨