資源描述：
《SNT1421-2004-豬水皰病病毒微量血清中和試驗.pdf》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、rI中華人民共和國出入境檢驗檢疫行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)SN/T1421-2004豬水疙病病毒微量血清中和試驗Micro-serumneutralizationtestforswinevesiculardiseasevirus2004-06-01發(fā)布2004-12-01實施中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局SN/T1421-2004..J‘.曰‘.ol1青本標(biāo)準(zhǔn)的附錄A是規(guī)范性附錄，附錄B是資料性附錄.本標(biāo)準(zhǔn)由國家認(rèn)證認(rèn)可監(jiān)督委員會提出并歸口。本標(biāo)準(zhǔn)起草單位:中華人民共和國珠海出人境檢驗檢疫局。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人:楊素、潘文波、廖秀云、馮家望。本標(biāo)
2、準(zhǔn)系首次發(fā)布的出人境檢驗檢疫行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)。SN/T1421-2004豬水疙病病毒微t血清中和試驗范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了豬水疙病病毒微量血清中和試驗方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于豬水疙病病毒中和抗體的檢測。2縮略語下列縮略語適用于本標(biāo)準(zhǔn)2.1CPE:致細(xì)胞病變作用。TCID,o:半數(shù)細(xì)胞感染量。SVD:豬水疤病。原理特異性的血清中和抗體與病毒結(jié)合后，能使病毒失去對敏感細(xì)胞的感染能力，從而阻止病毒的繁殖。這一反應(yīng)不但表現(xiàn)為一種病毒只能被相應(yīng)的免疫血清所中和，而且還表現(xiàn)在中和一定量的病毒，必須有一定效價的免疫血清。本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的中和試驗是以定量病毒稀釋血清為基礎(chǔ)，
3、當(dāng)血清能阻止定量病毒50%致細(xì)胞病變能力時，其血清的稀釋度即為其效價。因而本中和試驗是一種定量測定豬水疙病血清抗體的方法。試荊和材料4,1本標(biāo)準(zhǔn)所用試劑配制見附錄A,4.2本標(biāo)準(zhǔn)試劑除特殊規(guī)定外，均指分析純試劑。4.3本標(biāo)準(zhǔn)所用試劑、玻璃器皿除有特殊規(guī)定外，均需高壓滅菌。4.4病毒:用經(jīng)蝕斑法純化并經(jīng)血清學(xué)鑒定的豬水疙病病毒作為標(biāo)準(zhǔn)病毒。4.5標(biāo)準(zhǔn)血清:標(biāo)準(zhǔn)陰性血清采用無SVD病毒抗體的豬血清，標(biāo)準(zhǔn)強陽性和弱陽性血清采用SVD病毒感染發(fā)病后康復(fù)的豬血清。4.6細(xì)胞系:IB-Rs-2傳代細(xì)胞系.4.7細(xì)胞培養(yǎng)液:含10%胎牛血清(經(jīng)56
4、0C,30min滅能)及抗生素的細(xì)胞培養(yǎng)液。4.8細(xì)胞維持液:含2緯胎牛血清(經(jīng)56-C,30min滅能)及抗生素的細(xì)胞維持液。4.9細(xì)胞分散液。4.10固定液。4.11染色液。5器械和設(shè)備5.1二氧化碳培養(yǎng)箱、微量振蕩器、倒置顯微鏡、冰箱、超聲波細(xì)胞破碎儀.5.2100mL細(xì)胞培養(yǎng)瓶、96孔微量細(xì)胞培養(yǎng)板、吸頭、多道可調(diào)移液器、單道可調(diào)移液器.SN/T1421-20046預(yù)備試驗6.1將SVD病毒接種IB-Rs-2細(xì)胞單層，37℃吸附Ih后加人維持液，置5%二氧化碳培養(yǎng)箱于37`C培養(yǎng)，接種24h后用倒置顯微鏡逐日觀察，待CPE達(dá)7
5、5%以上，凍融一次或置冰浴中用超聲波處理(40pA,lmin),2000r/min離心20min，上清液分裝小瓶，每瓶1mL，置一70℃保存?zhèn)溆谩?.2病毒毒價的測定及其工作濃度的配制:將病毒原液用細(xì)胞維持液做10倍系列稀釋至I,)-，每個稀釋度作8個孔，每孔50pL，每孔加50pL工作細(xì)胞液，再補充細(xì)胞維持液50pL。每塊板設(shè)4孔正常細(xì)胞對照，于5寫二氧化碳培養(yǎng)箱37'C培養(yǎng)，從48h開始至96h用倒置顯微鏡逐日觀察記錄CPE，按Karber方法計算TCID;o。將病毒原液配制成100TCID;o/50pL，備用。6.3將標(biāo)準(zhǔn)陽性血
6、清、陰性血清、被檢血清經(jīng)560C30min滅能，備用。6.4將細(xì)胞用細(xì)胞培養(yǎng)液稀釋成工作細(xì)胞液(10‘個細(xì)胞/mL)，備用。7中和試驗7.1對照設(shè)立7.1.1細(xì)胞對照:設(shè)4孔正常細(xì)胞對照，每孔加工作細(xì)胞液50pL、細(xì)胞維持液100pL,7.1.2強陽性血清對照:將已知滴度的標(biāo)準(zhǔn)強陽性血清用細(xì)胞維持液在96孔微量培養(yǎng)板上從1:4開始做倍比系列稀釋，每個稀釋度作5個孔(50pL/孔),4孔加100TCID;o/50pL病毒懸液50pL，微量振蕩器振蕩混勻，置5%二氧化碳培養(yǎng)箱37℃中和Ih，再加人工作細(xì)胞液50kL/孔。余下的一孔作為7.
7、1.6所描述的血清毒性對照，7.1.3弱陽性血清對照:將已知滴度的標(biāo)準(zhǔn)弱陽性血清用細(xì)胞維持液在96孔微量培養(yǎng)板上從1，4開始做倍比系列稀釋，每個稀釋度作5個孔(50pL/孔),4孔加100TCID;a/50KL病毒懸液50pL，微量振蕩器振蕩混勻，置5%二氧化碳培養(yǎng)箱37℃中和1h，再加人工作細(xì)胞液50PL/孔。余下的一孔作為7.1.6所描述的血清毒性對照。7.1.4陰性血清對照:設(shè)5孔陰性血清對照4孔加陰性血清和100TCID5o/501}L病毒懸液各50pL,再加人工作細(xì)胞液50pLo余下的一孔作為7.1.6所描述的血清毒性對照。
8、7.1.5病毒回歸對照:將病毒稀釋為1000TCIDso/50I.L,100TCID;o/50yL,10TCIDso/50tL,1TCIDso/50pL，每個稀釋度作4孔，每孔加人病毒懸液50KL，再加人工作細(xì)胞液50K
