bfgf和celecoxib對胃癌bgc823細胞株增殖、凋亡的影響

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1、中國醫(yī)科大學研究生學位論文獨創(chuàng)性聲明本人申明所呈交的學位論文是我本人在導師指導下進行的研究工作及取得的研究成果。據(jù)我所知，除了文中特別加以標注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得我?；蚱渌逃龣C構(gòu)的學位或證書而使用過的材料，與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻均已在論文中作了明確的說明并表示謝意。申請學位論文與資料若有不實之處，本人承擔一切相關責任。論文作者簽名：型鹼翌日期：2堂2：!：：／，f中國醫(yī)科大學研究生學位論文版權(quán)使用授權(quán)書本人完全了解中國醫(yī)科大學有關保護知識產(chǎn)權(quán)的規(guī)定，即：研究生在攻讀學位期間論文工作的知識產(chǎn)

2、權(quán)單位屬中國醫(yī)科大學。本人保證畢業(yè)離校后，發(fā)表論文或使用論文工作成果時署名單位為中國醫(yī)科大學，且導師為通訊作者，通訊作者單位亦署名為中國醫(yī)科大學。學校有權(quán)保留并向國家有關部門或機構(gòu)送交論文的復印件和磁盤，允許論文被查閱和借閱。學?？梢怨紝W位論文的全部或部分內(nèi)容(保密內(nèi)容除外)，以采用影印、縮印或其他手段保存論文。論文作者簽名：指導教師簽名：日期：絲塑：!!!量·中文論著摘要·目的胃癌是世界上第二位的常見惡性腫瘤。因此，研究胃癌發(fā)生發(fā)展的機制，對防治胃癌及癌前病變具有非常重要的意義。堿性成纖維生長因子(basicfibroblastgrowthfactor,bFG

3、F)與腫瘤發(fā)生發(fā)展的關系極為密切。非甾體抗炎藥(NSAIDs)可降低胃腸道腫瘤發(fā)生的危險性，成為近年來腫瘤防治領域的又一研究熱點。celecoxib是非甾體抗炎藥的一種，目前celecoxib對BGC．823胃癌細胞株凋亡的影響機制不清。本實驗采取外源性bFGF和celecoxib(環(huán)氧合酶．2選擇性抑制劑)作用于胃癌BGC--823細胞，觀察其對胃癌BGC．823細胞株的生長，PKB活性，環(huán)氧合酶．2(cyclooxygenase，COX-2)、核轉(zhuǎn)錄因子r．B(nuclearfactor-r．B，NF-KB)及血管內(nèi)皮細胞生長因子(vascularendoth

4、elialgrowthfactor，VEGF)表達變化的影響以及P13K／PKB信號轉(zhuǎn)導通路在此過程中的作用，以探討bFGF和celecoxib在胃癌發(fā)病機制及防治胃癌中的作用和bFGF與celecoxib之間的相互作用影響。方法l熒光顯微鏡觀察celecoxib對胃癌BGC．823細胞株凋亡的影響。2MTT比色法觀察bFGF、PKB上游激酶P13K抑制劑wortmannin、celecoxib對胃癌BGC．823細胞株增殖的影響。3流式細胞術(shù)檢測celecoxib誘導胃癌BG-C．823細胞株凋亡。4Westernblot方法檢測bFGF對PKB的活化作用，bF

5、GF和celecoxib誘導的COX--2、NF--rB、VEGF表達變化。結(jié)果1bFGF對PKB活性的影響：不同濃度bFGF誘導BGC．823細胞PKB活性增高。經(jīng)25ng／mlbFGF誘導后磷酸化PKB表達量最大。25ng／mlbFGF與BGC-823細胞共同孵育5，10，30，60min．PKB活性在bFGF作用5min時開始升高，作用10min時達到高峰，其后活性開始下降，但均高于空白對照，各bFGF處理組與對照組之間差異具有統(tǒng)計學意義(P<0．205)。經(jīng)wortmannin預處理后，胃癌BGC．823細胞PKB活性與未經(jīng)預處理組相比降低，且差異顯著(P

6、<0．05)。2MTT比色試驗：顯示bFGF有明顯的促進BGC一823細胞增殖的作用(P<0．05)。celecoxib具有明顯的抑制BGc．823細胞增殖的作用，且呈明顯的劑量依賴性(P<0．05)。3細胞形態(tài)學觀察加入不同濃度的celecoxib后，光鏡下細胞形態(tài)發(fā)生明顯變化，部分貼壁細胞收縮變圓，漂浮。熒光顯微鏡觀測顯示celecoxib處理后，細胞形態(tài)不規(guī)則，隨時間和藥物濃度的增加，出現(xiàn)凋亡細胞。4流式細胞術(shù)celecoxib作用24h可明顯誘導BGC．823細胞發(fā)生凋亡，與藥物濃度成正相關“=0．99，P<0．01)。對照組、25、501unol／L組的

7、細胞凋亡率分別為2．39％、33．69％、59．98％。5Western印跡分析Western印跡分析顯示，bFGF能時效地誘導BGC．823細胞的COX--2、NF—KB、VEGF蛋白表達量增加。其中COX--2在24d,時、NF一心在12d,時和VEGF在24d,時分別表達量達到高峰，各bFGF作用時間點與對照比較結(jié)果有顯著性差異(P<0．01)。加入celecoxib后western印跡分析結(jié)果可見隨著藥物濃度的升高COX--2、NF—lcB、VEGF蛋白表達水平逐漸降低，具有劑量依賴性。與對照組相比25、501unol／L組中COX--2、NF--r,B、

8、VEGF蛋