柑橘citserk基因克隆、序列分析與其遺傳轉(zhuǎn)化

柑橘citserk基因克隆、序列分析與其遺傳轉(zhuǎn)化

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1、華中農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明及使用二一學(xué)位論文墨.如需保密,解密時(shí)間如歲年以月償日是否保密獨(dú)創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的論文是我個(gè)人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果.盡我所知,除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地3-外,論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果,也不包含為獲得華中農(nóng)業(yè)大學(xué)或其他教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書而使用過的材料,指導(dǎo)教師對(duì)此進(jìn)行了審定。與我一同工作的同志對(duì)本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中做了明確的說明,并表示了謝意。研究生簽名:I移訖S時(shí)間:炒7年。莎月,驢日學(xué)位論文使用授權(quán)書本人完全了解“華中農(nóng)業(yè)大學(xué)關(guān)于保存、使用學(xué)位論文的規(guī)定”,即學(xué)生必須按照學(xué)校要求提交

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3、????????????4縮略詞表???????????????????????????????..5.^.‘·—j一1只U舌???????????????????????????????????????????.61.1課題的提出???????????????????????????.61.2前人研究進(jìn)展??????????????????????????.61.2.1體細(xì)胞胚胎發(fā)生的概念及影響體細(xì)胞胚胎發(fā)生的相關(guān)因子?????61.2.1.1體細(xì)胞胚胎發(fā)生的概念??????????????????61.2.1.2影響體細(xì)胞胚胎發(fā)生的相關(guān)因子??????????????71.2.

4、1.3植物體細(xì)胞胚胎發(fā)生相關(guān)基因的分離與克隆?????????71.2.1.4植物體細(xì)胞胚胎發(fā)生相關(guān)特異蛋白????????????。91.2.2植物基因分離克隆方法研究進(jìn)展????????????????91.2.2.1同源序列法??????????????????????.101.2.2.2表達(dá)序列標(biāo)簽?????????????????????.101.2.3SERK基因的研究進(jìn)展????????????????????ll1.2.3.1SERK基因及SERK基因家族??????????????..1l1.2.3.2SERK編碼的蛋白???????????????????一11

5、1.2.3-3SERK基因的表達(dá)???????????????????一121.3本研究的目的和內(nèi)容??????????????????????..122材料和方法?????????????????????????????142.1材料???????????????????????????????????????..142.2方法???????????????????????????????????????..142.2.1RNA的提取????????????????????????..142.2.1.1RNA提取試劑?????????????????????.142.2.1.2R

6、NA提取步驟?????????????????????142.2.2大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞的制備?????????????????..152.2.3cDNA合成????????????????????????????????.162.2.4引物的合成、PCR擴(kuò)增、電泳????????????????..162.2.5PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的克隆和測序?????????????????..162.2.6質(zhì)粒DNA的提取及酶切???????????????????l72.2.6.1質(zhì)粒DNA的提取(堿裂解法)?????????????..172.2.6.2酶切???????????????????

7、??????.182.2.7序列分析??????????????????????????182.2.8Southern雜交?????????????????????????????。182.2.9Sense和Antisense植物表達(dá)載體構(gòu)建??????????????192.2.10柑橘愈傷組織的遺傳轉(zhuǎn)化??????????????????202.2.1.1柑橘愈傷組織的準(zhǔn)備??????????????????.202.2.1.2農(nóng)桿菌侵染液的制備?????????

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