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《腺病毒載體介導(dǎo)的rnai抑制肺間質(zhì)纖維化大鼠tgfβ1基因表達(dá)的研究》由會員上傳分享,免費(fèi)在線閱讀,更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、:.:?≮:o;i原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明:所呈交的學(xué)位論文,是本人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下,獨(dú)立進(jìn)行研究所取得的成果。除文中已經(jīng)注明引用的內(nèi)容外,本論文不包含任何其他個人或集體己經(jīng)發(fā)表或撰寫過的科研成果。對本文的研究作出重要貢獻(xiàn)的個人和集體,均已在文中以明確方式標(biāo)明。本聲明的法律責(zé)任由本人承擔(dān)。學(xué)位論文作者:泛。1審日期:跏,D年j月/日學(xué)位論文使用授權(quán)聲明本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下完成的論文及相關(guān)的職務(wù)作品,知識產(chǎn)權(quán)歸屬鄭州大學(xué)。根據(jù)鄭州大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定,同意學(xué)校保留或向國家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版,允許論文被查閱和借閱;本人授權(quán)鄭州大學(xué)可以將本
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3、,是異質(zhì)性疾病,也是多種肺疾病的共同結(jié)局,其發(fā)病機(jī)制復(fù)雜,研究證實(shí)肺間質(zhì)纖維化的發(fā)生、發(fā)展與轉(zhuǎn)化生長因子.BI(TGF.131)的高表達(dá)密切相關(guān)。轉(zhuǎn)化生長因子.13I(TGF一131)是公認(rèn)的肺間質(zhì)纖維化形成和發(fā)展中的“開關(guān)性"細(xì)胞因子,作為一種多功能及強(qiáng)效的致纖維化因子,參與調(diào)控細(xì)胞的分化、增殖及細(xì)胞外基質(zhì)(extracellularmembrane)分泌,增加ECM的聚積并抑制其降解,在肺纖維化形成過程中主要作用于膠原的轉(zhuǎn)錄和翻譯過程,誘導(dǎo)前膠原mRNA的產(chǎn)生,促進(jìn)膠原蛋白的形成和沉積,是纖維化發(fā)生過程中最直接的一種細(xì)胞因子。抑制TGF.131基因表達(dá)顯
4、然有助于延緩肺纖維化進(jìn)程,而應(yīng)用常規(guī)抗纖維化藥物抑制其表達(dá)的效果并不理想。RNA干擾(RNAinterference,RNAi)是新近出現(xiàn)的一種分子生物學(xué)技術(shù),它通過導(dǎo)入由對應(yīng)的正義RNA和反義RNA組成的雙鏈RNA(doublestrandRNA,dsRNA),誘導(dǎo)受體細(xì)胞中與其有同源序列的特異性靶mRNA降解,阻止蛋白質(zhì)的翻譯過程,其作用類似于基因敲除,但基因表達(dá)并未永遠(yuǎn)消除,因而又被稱為“基因沉默”。摘要目的本研究針對大鼠TGF.13l的mRNA序列設(shè)計(jì)、合成并構(gòu)建具有特異性阻斷大鼠轉(zhuǎn)化生長因子131(TGF一131)基因的TGF.131siRNASh
5、uttle載體,然后重組入腺病毒載體,包裝成轉(zhuǎn)化生長因子受體B1(TGF.131)siRNA的腺病毒,將腺病毒載體局部轉(zhuǎn)染肺問質(zhì)纖維化大鼠,觀察并分析其對TGF.13lmRNA表達(dá)的抑制作用,為肺纖維化的防治提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。材料和方法‘60只SD雄性大鼠,生理鹽水對照組、重組復(fù)制缺陷型TGF一131腺病毒治療組、空載體對照組,第0d經(jīng)氣管滴入0.3ml的博來霉素(BLM3mg/kg)建立肺間質(zhì)纖維化模型,空白對照組大鼠滴注等體積生理鹽水,治療組于滴入博來霉素24h后經(jīng)鼻滴入重組復(fù)制缺陷型TGF.IBl腺病毒(AdCMVTGF.61)lox109空斑形成單位(p
6、fu)(1001-tl/鼠),生理鹽水組于造模后24h經(jīng)鼻滴入同體積的生理鹽水,同時設(shè)立無外源活性基因的復(fù)制缺陷型腺病毒(AdCMVNuII)空載體對照組,空白。對照組于24h給予氣管內(nèi)滴入同體積生理鹽水。各組動物于7、14、28d隨機(jī)處死5只,取肺組織肺行蘇木精伊紅(HE)染色;免疫組化法檢測肺組織TGF一131的蛋白表達(dá)水平;熒光定量PCR檢測肺組織中TGF.13mRNA的表達(dá)水平;ELISA法檢測血清中TGF.B的蛋白的表達(dá)水平,評價其對全身的影響。結(jié)果HE染色示治療組各時期肺泡炎和肺纖維化程度均較生理箍水對照組及空載體對照組輕;免疫組化結(jié)果顯示治療組
7、與生理鹽水及空載體對照組相比肺組織TGF.t31蛋白表達(dá)水平降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);實(shí)時熒光定量PCR結(jié)果顯示治療組TGF.BlmRNA表達(dá)水平與生理鹽水及空載體對照組比較降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論腺病毒介導(dǎo)的RNAi可以抑制肺纖維化鼠肺組織TGF.131的表達(dá),減輕肺纖維化大鼠肺泡炎和肺纖維化,對血清中酌TGF.131表達(dá)影響較小,有望成為防治肺問質(zhì)纖維化的一種手段。IIIAbstractTheStudiesonInterferenceEffectof
8、RNAiMediatedbyAdenovirusVe