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《酵母雙雜交法篩選和bace蛋白有相互作用蛋白》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫(kù)。
1、摘要0一淀粉樣前體蛋白APP(p—amyloidprecursorprotein)水解產(chǎn)生的B一淀粉樣蛋白(p—amyloidpeptides，AB)在阿爾茨海默氏癥(hlzheimerDisease，AD)的發(fā)病機(jī)理中起著重要的作用，BACE(B—siteAPP—cleavingenzyme)被認(rèn)為是AB形成的關(guān)鍵酶，已經(jīng)成為近年來阿爾茨海默氏癥研究及篩選藥物靶的熱點(diǎn)之一。為了更好的認(rèn)識(shí)和理解BACE在阿爾茨海默氏癥病理過程中的作用機(jī)制，我們利用酵母雙雜交法篩選與之有相互作用的蛋白。用BACE作為誘餌蛋白篩選人胎腦文
2、庫(kù)后，得到65個(gè)陽性克隆。經(jīng)測(cè)序和序列比對(duì)，我們選擇三個(gè)蛋白進(jìn)行深入研究：分別為flotillin蛋白、毒蕈堿受體CHRMl蛋白(cholinergicreceptormuscarinic1)及乙酰膽堿酯酶膜錨定蛋白(acetylcholinesteraseputativemembraneanchor)。13一半乳糖苷酶活性測(cè)定說明這三個(gè)蛋白在酵母AHl09中可以與BACE發(fā)生相互作用。我們還構(gòu)建了可以在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中表達(dá)的這三個(gè)蛋白的質(zhì)粒，為進(jìn)一步驗(yàn)證它們是否能在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中發(fā)生相互作用做好了準(zhǔn)備。我們的實(shí)驗(yàn)首次發(fā)
3、現(xiàn)了flotillin蛋白、CHRMl以及乙酰膽堿酯酶膜錨定蛋白都能與BACE發(fā)生直接相互作用，為進(jìn)一步研究BACE的定位、在AD病理作用中的信號(hào)傳導(dǎo)途徑及作用機(jī)制提供了依據(jù)。關(guān)鍵詞：酵母雙雜交；BACE：ADAbstractThe13-amyloidpeptides(A13)derivedfromproteolyticcleavageoftheamyloidprecursorprotein(APP)playamajorroleinthepathogenesisofAlzheimer’sdisease(AD)byfor
4、mingaggregated，fibrillarycomplexesthathavebeenshowntobeneurotoxic．The3-siteAPPcleavingenzyme(BACE)hasbeenidentifiedasakeyenzymeleadingto3-amyloidfomaation．TofurtherunderstandthefunctionandmechanismofBACEinthepathologyofAD，weutilizedBACEasthebaittoscreenfetalbrai
5、neDNAlibraryusingtheyeasttwo—hybridsystem．Fromthe65poskiveclonesob協(xié)ined，wechoseflotillin，cholinergiereceptormuscariniel(CHRMl)andaeetylcholinesteraseputativemembraneanchorforfurtherresearch．The3-galactosidaseactivityassaydemonstratedthatflotillin，CHRMlandacetylc
6、holinesteraseputativemembraneanchorcaninteractwithBACEinyeaststrainAHl09．WealsoconstructedplasmidsthatcanexpressthethreeproteinsindividiallyinmammaliancellstoconfirmtheirputativeinteractionswithBACE．OurresultsfirstdemonstratedthatBACEcaninteractwiththesethinepro
7、teinsinyeaststrainAHl09．Ourresultmaycontributetofurtherunderstandingoflocalization，signaltransduetionandmechanismofBACEinADKeyword：YeastTwoHybrid；BACE；AD廈門大學(xué)學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明茲呈交的學(xué)位論文，是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下獨(dú)立完成的研究成果。本人在論文寫作中參考的其他個(gè)人或集體的研究成果，均在文中以明確方式標(biāo)明。本人依法享有和承擔(dān)由此論文而產(chǎn)生的權(quán)利和責(zé)任。學(xué)位論文作者簽名：
8、lt、羲孰}日期：2006年4月21日。聲明人(簽名)：閥乏研l(wèi)印∥年7月z／日廈門大學(xué)學(xué)位論文著作權(quán)使用聲明本人完全了解廈門大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定。廈門大學(xué)有權(quán)保留并向國(guó)家主管部門或其指定機(jī)構(gòu)送交論文的紙質(zhì)版和電子版，有權(quán)將學(xué)位論文用于非贏利目的的少量復(fù)制并允許論文進(jìn)入學(xué)校圖書館被查閱，有權(quán)將學(xué)位論文的內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)
