菝葜治療慢性盆腔炎的活性部位篩選及作用機(jī)制研究 (1)

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1、南方醫(yī)科大學(xué)2010級博士學(xué)位論文菝葜治療慢性盆腔炎的活性部位篩選及作用機(jī)制研究ScreeningofBioactiveFractionfromSmilaxchinaLforCPIDandStudyontheUnderlyingMechanismofActionthereof課題來源：自選課題學(xué)位申請人導(dǎo)師姓名專業(yè)名稱培養(yǎng)類型培養(yǎng)層次所在學(xué)院馬云侯連兵藥理學(xué)學(xué)術(shù)型博士藥學(xué)院2013年5月13日廣州博士學(xué)位論文麴Y2406磐Ill一菝葜治療慢性盆腔炎的活性部位篩選及作用機(jī)制研究博士研究生：馬云指導(dǎo)教師：侯連兵

2、摘要課題背景和目的慢性盆腔炎疾病(CPID)系指女性內(nèi)生殖器官、周圍結(jié)締組織及盆腔腹膜發(fā)生慢性炎癥所致?？捎杉毙耘枨谎?PID)治療不徹底轉(zhuǎn)變而成，這是CPID發(fā)病的主要原因；亦可因體質(zhì)較強(qiáng)，或感邪較輕，受病后表現(xiàn)為癥狀較輕，病勢較緩的慢性盆腔炎【11。據(jù)美國疾病控制和預(yù)防中心調(diào)查，美國每年150多萬婦女患PID，住院費(fèi)用達(dá)10．6億美元左右，并且每年有上百的PID患者死于并發(fā)癥。在美國青少年P(guān)ID感染率比成年婦女高，15～24歲婦女是該疾病高發(fā)人群，以美國黑人和拉美裔女性較為常見12】。據(jù)世界衛(wèi)生組織估計

3、，傳播疾病泛濫導(dǎo)致全世界每年新增3億3千多萬性病患者，其中有100／0-20％將發(fā)展成為CPID[31。在我國，由于個人衛(wèi)生條件及醫(yī)療條件的限制，或在婦科小手術(shù)和計劃生育手術(shù)中無菌操作不當(dāng)，加之廣泛應(yīng)用宮內(nèi)節(jié)育器時患者不注意個人衛(wèi)生等原因，使盆腔炎的發(fā)病率逐年提高。同時隨著性病在我國的發(fā)病率呈逐年升高趨勢，由此引起的盆腔炎也在增多。由于抗生素及手術(shù)治療CPID有許多弊端，中藥治療已日益成為治療CPID的研究熱點(diǎn)。大量文獻(xiàn)報道盆益康合劑H、黃芪注射液[51等均能表現(xiàn)出既抗炎、又不易耐藥的良好特性，且具有用藥安

4、全有效、副作用小、費(fèi)用較低等優(yōu)點(diǎn)。金剛藤為菝葜的根部，為傳統(tǒng)活血化瘀中藥，市售金剛藤膠囊(菝葜提取物)己銷售十余年，用于治療CPID療效顯著，但其制劑較粗、藥效機(jī)理也未能得很好的闡明。因此，進(jìn)一步開發(fā)菝葜單味藥制備成有效部位，并探討其抗炎及免摘要疫調(diào)節(jié)作用等與其治療作用相關(guān)的機(jī)制具有較高的學(xué)術(shù)價值和實(shí)用臨床意義。本課題通過觀察小鼠耳腫脹、大鼠棉球肉芽腫及大鼠慢性盆腔炎疾病(CPID)模型中小鼠耳腫脹度、大鼠棉球肉芽腫抑制率、CPID動物血液學(xué)指標(biāo)及病理改變，對菝葜醇提物及其3個化學(xué)部位，即：乙酸乙酯部位、正

5、丁醇部位和水溶液部位的抗炎及抗CPID活性作用進(jìn)行了比較和篩選，以確定其抗炎和抗CPID的活性部位，并通過柱分離對該部位做進(jìn)一步的分離純化，采用HPLC檢測其含量對其進(jìn)行質(zhì)量評價。在獲得了藥效確切的活性部位后，亦通過觀察其對CPID模型大鼠血清、子宮組織中炎癥細(xì)胞因子、粘連相關(guān)指標(biāo)的影響，探討該活性部位對CPID的抗炎、抗粘連的免疫調(diào)節(jié)機(jī)制。本研究力圖對菝葜的抗炎及抗CPID的有效物質(zhì)進(jìn)行富集，并闡明其藥理活性和作用機(jī)制，有助于獲得藥效物質(zhì)相對明確、藥理活性相對特異的菝葜活性部位，為進(jìn)一步開發(fā)菝葜抗CPID

6、有效部位甚至單體化合物制劑提供科學(xué)依據(jù)。課題實(shí)驗方法和結(jié)果1、菝葜的提取分離：采用正交設(shè)計L9(34)表，以乙醇濃度、乙醇用量、提取時間為考察因素，以HPLC色譜測定落新婦苷及黃杞苷的含量為考察指標(biāo)，對菝葜的提取方法進(jìn)行篩選，并確定菝葜最佳提取工藝。落新婦苷及黃杞苷的含量測定條件為：HypersilODSC18色譜柱；流動相：乙腈：0．04％磷酸水；檢測波長均為290nm；柱溫：室溫；流速：0．7ml·min一。對正交試驗所得各工藝樣品的落新婦苷和黃杞苷含量分別進(jìn)行方差分析，結(jié)果顯示：乙醇濃度對實(shí)驗結(jié)果有顯

7、著性影響，其余各因素水平對實(shí)驗結(jié)果的影響均無顯著性差異(P>0．05)。隨后采用綜合平衡法對實(shí)驗結(jié)果進(jìn)行直觀分析，得到菝葜最佳提取工藝為：將菝葜飲片粉碎成小顆粒狀，加70％乙醇按乙醇：水為1：8、1：5、1：5提取3次，提取時間分別為2h、2h、1h。提取液過濾后，濾液減壓回收乙醇并濃縮至無醇昧，置于冰箱中冷藏12h，取出藥液，抽濾，合并濾液，加水定容即得，用于后續(xù)的研究。博士學(xué)位論文2、菝葜提取液3個化學(xué)部位的制備：采用液液萃取方法進(jìn)行，以乙酸乙酯對提取液萃取得到乙酸乙酯部位，萃取后的藥液再以正丁醇萃取得

8、到正丁醇部位，剩下的藥液為水溶液部位。乙酸乙酯和正丁醇萃取均采用水飽和的乙酸乙酯和水飽和的正丁醇，按體積比1：1萃取至基本呈無色。采用25％苯酚膠漿0．06ml注入大鼠右側(cè)子宮制備大鼠CPID模型，觀察菝葜醇提物及3個化學(xué)部位高、中、低(相當(dāng)于臨床等效劑量的4、2、1倍)劑量組對CPID模型大鼠血液學(xué)及組織病理形態(tài)學(xué)改變的影響，探討其對CPID的治療作用；采用二甲苯致小鼠耳腫脹法，觀察菝葜醇提物及3個化學(xué)部位高、